新城疫病毒抗体酶联免疫诊断试剂检验方法

新城疫病毒抗体酶联免疫诊断试剂检验方法

广州健仑生物科技有限公司

【产品名称】
　　通用名称：新城疫病毒抗体酶联免疫诊断试剂检验方法

英文名称：Newcastle disease virus Antibody Test Kit  (ELISA)

【包装规格】48份/盒、96份/盒

【预期用途】鸡新城疫是由新城疫病毒(Newcastle disease virus ,NDV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。本病主要特征是呼吸困难、严重下痢、粘膜和浆膜出血，病程稍长的伴有神经症状。鸡感染后，体内会产生特异性抗体。检测抗新城疫病毒抗体可作为该病疫苗免疫状况及该病辅助检测指标。本试剂盒采用ELISA方法检测鸡血清中的特异性抗新城疫病毒抗体。本试剂灵敏度高，特异性强，重复性好，操作方便快速，可分多次使用。

【主要组成成份】

【储存条件及有效期】

• 2~8℃避光保存，防止冷冻，有效期为12个月。
• 包被板开封后2~8℃避光保存，使用期限为15天。

【适用仪器】

含450nm和630nm波长酶标仪；37℃恒温设备；可调微量移液器。

【样本要求】

• 为取得佳实验效果，避免使用含叠氮钠、高血脂、长菌以及严重溶血的样品；
• 短期（7天）将进行检测的血清样品可存放于2～8℃；如需长期保存，应置于-20℃或以下，避免反复冻融。

【检验方法】

• 洗涤液配制：用蒸馏水或去离子水将浓缩洗涤液（2号液）按1：10稀释（如取50ml浓缩液与450ml蒸馏水或去离子水），充分混匀即为工作洗涤液。
• 样本稀释：用样本稀释液（5号液）将待检血清按1:100稀释（如5μl血清＋495μl样本稀释液），充分混匀。 阴性、阳性对照品不用稀释，直接加样。
• 加样反应：每次试验设阴性对照2孔、阳性及空白对照各1孔（分别加入阴性、阳性对照及样本稀释液100μl）。样本检测孔每孔加已稀释血清样本100μl。37℃避光反应30分钟。甩去孔内液体，每孔注满工作浓度洗涤液洗涤3次，每次均需停留1分钟；zui后一次甩净，拍干。
• 加酶反应：除空白对照孔外，其余每孔加酶结合物（1号液）1滴，37℃避光反应30分钟。甩去孔内液体，如上洗涤，拍干。
• 显色反应：加底物（3号液）和显色剂（4号液）各1滴，混匀，37℃下避光显色10分钟。
• 加终止液（6号液）1滴，以空白对照调零，用酶标仪于450nm波长（630nm作为参比波长）读取OD值。
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• 【参考值】

• Cut-off 值 (COV)=阴性对照平均OD值×2.1 (阴性对照孔OD值＜0.08时按0.08计)。
• 有效性判定：

• 空白对照孔OD值＜0.05（若大于0.05则实验无效）；

  阴性对照孔OD值≤0.10（若大于0.10则实验无效）；

  阳性对照孔OD值≥0.3（若小于0.3则实验无效）。

  【检验结果的解释】

  样本OD值≥COV值时，判为新城疫病毒抗体阳性，

  样本OD值＜COV值时，判为新城疫病毒抗体阴性。                         

  【检验方法的局限性】本试剂仅适用检测鸡血清。

  【注意事项】

• 包被板须密封防潮。从冷藏环境中取出时，应平衡至室温后，方可开封启用。未使用完的板条应即时放回有干燥剂的自封袋中，4℃密封保存。
• 滴加试剂前应将滴瓶轻摇、混匀，首滴弃去；滴加试剂时瓶身应保持竖直。
• 瓶盖每次使用后要盖紧，各瓶盖之间不可混用。不同批号试剂盒的试剂组份不可混用。
• 孵育时，推荐使用水浴箱。如无水浴箱，可取密封湿盒放入37℃温箱内使用。
• 用弃的试剂盒及样本都应按污染物妥善处理。试剂盒内终止液有腐蚀性，须小心使用。

健仑生物有以下检测试剂：

新城疫病毒为副黏病毒科新城疫样病毒属（Avulavirus）的禽副黏病毒I型（APMV一1）。病毒存在于病禽的所有组织器官、体液、分泌物和排泄中，以脑、脾、肺含毒量zui高，以骨髓含毒时间zui长。在低温条件下抵抗力强，在4℃可存活1～2年，一20℃时能存活10年以上；真空冻干病毒在30"C可保存30天，15℃可保存230天；不同毒株对热的稳定性有较大的差异。
该病毒对消毒剂、日光及高温抵抗力不强，一般消毒剂的常用浓度即可很快将其杀灭，很多种因素都能影响消毒剂的效果，如病毒的数量、毒株的种类、温度、湿度、阳光照射、贮存条件及是否存在有机物等，尤其是以有机物的存在和低温的影响作用zui大。