兔肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISA试剂盒
兔肿瘤坏死因子α（TNF-α）定量检测试剂盒（ELISA）
使用说明书
【试剂盒名称】
兔肿瘤坏死因子α（TNF-α）定量检测试剂盒（ELISA）
兔肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISA试剂盒【试剂盒用途】
定量检测兔血清、血浆及相关液体样本中肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量。
兔肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISA试剂盒【检测原理】
本试剂盒采用双抗体一步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本和酶标工作液加入到预先包被兔肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体的透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入显色剂A、B液，显色剂（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中兔肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中兔肿瘤坏死因子α（TNF-α）含量。
【试剂盒组成】
| 1 | 酶标包被板 | 12孔×8条 | 7 | 显色剂A液 | 6mL |
| 2 | 标准品：320pg/mL | 0.6mL | 8 | 显色剂B液 | 6mL |
| 3 | 20倍浓缩洗涤液 | 25mL | 9 | 终止液 | 6mL |
| 4 | 标准品稀释液 | 6mL | 10 | 说明书 | 1份 |
| 5 | 样本稀释液 | 6mL | 11 | 封板膜 | 2张 |
| 6 | 酶标试剂 | 6mL | 12 | 密封袋 | 1个 |
备注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：320、160、80、40、20、10 pg/mL
【需要而未提供的试剂和器材】
1、
2、标准规格酶标仪
3、精密移液器及一次性吸头
4、蒸馏水
5、一次性试管
6、吸水纸
【操作步骤】
1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。
2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；每孔再加入酶标工作液100μL；空白对照孔不加。
4、温育：
5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。
6、显色：每孔先加入显色剂A 液50μL，再加入显色剂B液 50μL，
7、终止：取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应（颜色由蓝色立转黄色）。
8、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值（OD值）。
9、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。
【样本要求】
1、样本不能含叠氮钠（NaN3），因为叠氮钠（NaN3）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。
2、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能立即试验，可将标本放于
3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。
【注意事项】
1、实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。
2、酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。
3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。
4、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。
5、为避免交叉污染，标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头；酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分，要悬臂加样，不得碰到微孔；不得重复使用封板膜。
6、试剂盒保质期内使用，不同批号的试剂不得混用。
7、底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
【操作程序总结】
准备试剂，样品和标准品
计算
【检测范围】
10-320pg/mL
【规格】
96人份/盒
【贮藏】
2
【有效期】
6个月
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