使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
运输及保存:低温运输,-20℃保存,有效期一年。使用本试剂盒提供的阳性对照时,由于其浓度较高,一定要注意不要污染其他试剂和成分。在专门的区域操作。
产品名称 | |
英文名称 | Dactylogyrus spp.PCR |
货号 | YZP3530 |
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。注意事项:
①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
以下是指环虫属通用PCR检测试剂盒说明书的相关产品:
丹参酮ⅡA磺酸钠 英文名称:Tanshinone II A sodium sulfonate 规格::20mg 保存::-20℃,避光
脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯 英文名称:Dehydroandrographolide succinate 规格::20mg 保存::-20℃,避光
雷公藤酯甲 英文名称:Tripterygium wilfordii schisantherin 规格::20mg 保存::-20℃,避光
胡黄连苷-Ⅱ 英文名称:Picroside II 规格::20mg 保存::-20℃,避光
总银杏酸 英文名称:Total ginkgolic acid 规格::30mg 保存::-20℃,避光
重楼皂苷 VⅡ 英文名称:Paris polyphylla saponin V II 规格::10mg 保存::-20℃,避光
重楼皂苷 Ⅵ 英文名称:Paris polyphylla saponin 规格::20mg 保存::-20℃,避光
重楼皂苷 II 英文名称:Paris polyphylla saponin II 规格::20mg 保存::-20℃,避光
重楼皂苷 I 英文名称:Paris polyphylla saponin I 规格::20mg 保存::-20℃,避光
西红花苷-I 英文名称:Crocin -I 规格::20mg 保存::-20℃,避光
西红花苷-Ⅱ 英文名称:Crocin II 规格::20mg 保存::-20℃,避光
青阳参苷元 英文名称:Qingyang ginseng glucoside yuan 规格::20mg 保存::-20℃,避光
甲基橙皮苷 英文名称:Methyl hesperidin 规格::50mg 保存::-20℃,避光
降香挥发油 英文名称:The volatile oil of Dalbergia odorifera 规格::0.2ml 保存::-20℃,避光
指环虫属通用PCR检测试剂盒说明书人膜联蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)抗体(IgM)ELISA Kit Human Annexin Ⅴ(ANX-Ⅴ)antibody(IgM)ELISA Kit
人含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨酸激酶1(Tie-1)ELISA Kit Human Tie-1 ELISA Kit
鸡糖皮质激素(GC)ELISA Kit Chicken glucocorticoid,GC ELISA Kit
猪凝血因子Ⅱ(FⅡ)ELISA Kit Pig coagulation factor Ⅱ,FⅡ ELISA Kit
绵羊卵泡刺激素(FSH)ELISA Kit Sheep Follicle Stimulating Hormone,FSH ELISA kit
人Toll样受体3(TLR3)ELISA Kit Human TLR3 ELISA Kit
大鼠脱氢表雄酮硫酸酯(DHEA-S)ELISA Kit Rat Dehydroepiandrosterone sulfate,DHEA-S ELISA Kit
小鼠可溶性Toll样受体9(sTLR9/sCD289)ELISA Kit Mouse Soluble Toll-like Receptor 9,sTLR9/sCD289 ELISA Kit
猪磷酸甘油酸酯激酶2(PGK2)ELISA Kit Pig Phosphoglycerate kinase 2,PGK2 ELISA kit
大鼠纤维蛋白原α链(Fga)ELISA Kit Rat fibrinogen alpha chain,Fga ELISA kit
大鼠T细胞活化核因子5(NFAT5)ELISA Kit Rat nuclear factor of activated T-cells 5,NFAT5 ELISA Kit
豚鼠Ⅱ型肺泡细胞表面抗原(KL-6)ELISA Kit Guinea pig KL-6 (Krebs yon den Lundgen-6) ELISA Kit
人极低密度脂蛋白(VLDL)ELISA Kit Human very low density lipoprotein,VLDL ELISA Kit
小鼠多肽YY(PYY)ELISA Kit Mouse Peptide YY,PYY ELISA kit