暗视野显微镜【Dark field Microscope】的原理和结构特点:在日常生活中,室内飞扬的微粒灰尘是不易被看见的,但在暗的房间中若有一束光线从门缝斜射进来,灰尘便粒粒可见了,这是光学上的丁达尔现象。
暗视野显微镜就是利用此原理设计的。它的结构特点主要是使用遮光板或暗视野聚光器,常用的是抛物面聚光器,使光源的光束被阻挡.不能由下而上地通过标本进入物镜。从而使光线改变途径,倾斜地照射在观察的标本上,标本遇光发生反射或散射,散射的光线投入物镜内,因而整个视野是黑暗的。在暗视野中所观察到的是被检物体的衍射光图像.并非物体的本身,所以只能看到物体的存在和运动,不能辨清物体的细微结构。但被检物体为非均质时,并大于1/2波长,则各级衍射光线同时进入物镜,在某种程度上可观察物体的构造。一般暗视野显微镜虽看不清物体的细微结构,但却可分辨0.004um以上的微粒的存在和运动,这是普通显微镜(的分辨力为0.2um)所不具有的特性,可用以观察活细胞的结构和细胞内微粒的运动等。
暗视野显微镜遮光板的制作:普通显微镜只要聚光器是可以拆卸的,支架的口径适于安装暗视野聚光器,即可改装成暗视野显微镜。在无暗视野聚光器时,可用厚黑纸片制作一个遮光板,放在普通显微镜的聚光器下方的滤光片框上,也能得到暗视野效果。
(1).将显微镜聚光器调到位置,用低倍镜对好焦距。
(2).取下目镜,从镜筒中观察并调节光阑的大小,使其与镜筒中所见物镜的视野相等。
(3).用厚黑纸剪制挡光板。外圈直径与滤光片框架相同,部分的大小与调节好的光阑孔径一样(可用半透明的小纸片,放在通光孔处聚光镜镜面上,纸上显示的光斑即为光阑的孔径,再用圆规量取大小)。
(4).将挡光板放在滤光片框架上,开大光阑进行样品观察。
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