MTT检测试剂盒（改良型甲臜溶解液）江苑

产品简介

MTT全称为3-(4,5-Dimethyl-2-Thiazolyl)-2,5-Diphenyl Tetrazolium Bromide，（Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide），中文名简称：噻唑蓝。CAS号298-93-1，分子式为C₁₈H₁₆BrN₅S，分子量为414.32。

MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒江苑生物（MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit）是一种非常经典的细胞增殖和细胞毒性检测试剂盒，被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）或特定的甲臜溶解液能溶解细胞中的甲臜，用酶标仪在570 nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。本试剂盒本底低，灵敏度高，线性范围宽，使用方便。

本公司提供两种MTT检测试剂盒：JY02021 MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒和JY02022 MTT检测试剂盒。传统MTT检测方法中，由于产生的甲臜是不溶于水的，需要先将上层反应液移除，再加入DMSO溶解甲臜，此步操作容易吸走甲臜造成实验误差，且增加了悬浮细胞实验的困难。“JY02021 MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒”采用了*的甲臜溶解液配方，无需去除原有的培养液，可以直接加入甲臜溶解液溶解甲臜，从而避免了由于去除培养液时甲臜被部分去除而引起的误差，且悬浮细胞更适用。而“JY02022 MTT检测试剂盒”保留了DMSO溶解甲臜的策略，但显著缩短了甲臜溶解时间，从原来的数小时缩短为数分钟，节约了实验时间。

本公司还提供更优的CCK-8试剂盒（JY02031），适用于贴壁和悬浮细胞的增殖和毒性检测。

保存条件

冰袋运输；未开封时4ºC保存，1年有效。开封后，将MTT粉末配制成MTT溶液，需-20ºC避光保存；甲臜溶解液4ºC和室温保存均可。

注意事项

1．使用96孔板进行检测，若细胞培养时间较长，需注意孔板外圈培养液蒸发。可以弃用外圈板孔，改加PBS，水或培养液并将孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解培养液蒸发。

2．MTT配制成溶液后为黄色，需避光保存，长时间光照会导致失效。当颜色变为灰绿色时，请勿使用。

3．甲臜溶解液低温保存可能会产生沉淀，只需 37℃水浴使其充分溶解，混匀后即可使用。

4．加入甲臜溶解液后请适当轻轻混匀，但须注意避免产生泡沫。

5．本产品仅用于科学研究，不得用于临床诊断和治疗，不得用于食品和药品，不得存放于普通住宅内。

6．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明

A．MTT溶液的配制：

用5 mL MTT溶剂溶解25 mg MTT，配制成5 mg/mL的MTT溶液。配制后即可使用，或直接-20ºC避光保存，也可以根据需要适当分装后-20ºC避光保存。

B．MTT检测（以96孔为例）：

1．收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，铺于96孔板。贴壁细胞1000-10000/孔，悬浮细胞10000-100000/孔（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。按照实验需要，进行培养并给予药物处理（含有药物的培养基也为100 μL）。

注：● 96孔板四周的32个边孔不要使用，建议加入灭菌PBS补齐。因边孔水分蒸发快，培液会出现浓缩现象，细胞状态处理条件等都不再准确，通常将其称为“边缘效应”。

● 实验时应设置调零孔，对照孔和加药孔。调零孔加培养基、MTT、二甲基亚砜（无细胞的空白对照）。对照孔和加药孔都要加细胞、培养液、MTT、二甲基亚砜，不同的是对照孔加溶解药物的介质，而加药组加入不同浓度的药物。每组设3-6个副孔。

2．可选：若因培养时间较长，培养液蒸发导致每孔液面差异较大，需更换新鲜培养基。短期无需此步。

对于贴壁细胞，去除旧的培养液，更换100 µL/孔新鲜的培养液；对于悬浮细胞，离心96孔板，去除尽可能多的上清液，然后加入100 µL/孔新鲜的培养液重悬细胞。

3．每孔加入10 μL MTT溶液，适当混匀，在细胞培养箱内继续孵育4 h。

4．每孔加入100 μL甲臜溶解液，适当混匀，在细胞培养箱内再继续孵育。直至在普通光学显微镜下观察发现甲臜全部溶解。通常37ºC孵育3-4 h左右，紫色结晶会全部溶解。如果紫色结晶较小较少，溶解时间会缩短。如果紫色结晶较大较多，溶解时间会延长，此时为加速溶解可以适当振摇数次。

5．在570nm测定吸光度。如无570nm滤光片，可以使用560-600nm的滤光片。

MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒江苑生物