【适用范围】
T7 RNA聚合酶（T7 RNA Polymerase）是一种是一种来源于T7噬箇体的RNA聚合酶，分子量约99kDa。专门催化5'→3'方向的RNA形成过程，对T7噬箇体启动子具有高特异性。T7 RNA聚合酶是一种DNA 依赖性的RNA 聚合酶,能够在体外以单链或双链DNA为模板，从启动子开始催化模板DNA下游5'→3' RNA 合成，具有高的转录效率。
【产品组分】
组分 | 体积 |
T7 RNA聚合酶（1mg/mL） | 20 μL |
5×Transcription Buffer | 50 μL |
1×Transcription Buffer: 40 mM Tris-HCl, pH 7.8, 20 mM NaCl2, 6 mM MgCl2, 2 mM spermidine-HCl, 10 mM DTT
【储存条件及效期】
T7 RNA聚合酶 于-20 ℃保存，有效期为24 个月。
【热失活】
70℃，10min
【反应体系及条件】
组分 | 体积 |
5×Transcription Buffer | 10μL |
ATP/GTP/CTP/UTP(25 mM each) | 4μL |
T7 RNA Polymerase（1 mg/ mL） | 5μL |
RNase Inhibitor（40 U/μl） | 1μL |
DNA 模板 | 1μg |
DEPC-treated Water | Up to 50 μL |
a. 37度孵育2小时
b. 如需去除DNA模板，加入2μL DNase I（1U/μl）终止反应
c. 终止反应：加入2 μL 0.2 M EDTA(pH8.0)或者 70°C反应10 min。
【注意事项】
1. 转录反应体系的配制应在无 RNase 污染的环境中完成，操作过程建议佩戴手套以及口罩，使用高压灭菌的水及枪头。
2. 该酶活性强，对模板DNA纯度要求不高，PCR产物经乙醇沉淀后可直接用于转录。
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