质量光度仪

2018年，牛津大学的Philipp Kukura团队宣布一种全新技术：在干涉反射显微镜和干涉散射显微镜的原理之上，通过单分子散射光的方式准确测量溶液中单个分子的质量，为生物分析和研究生物分子的功能开辟了新的方法：质量光度法

质量光度法是一种革命性的分析生物分子的新方法，即超微量单分子质量和分布测量分析法是一种革命性的分析生物分子的新方法。它能够在溶液中准确测量单个分子的质量，不需要任何偶联固化或者标记标签，在天然状态下，完成对生物分子的分析。这种方法为生物分析和生物分子功能研究开辟了新的可能性 ，可以以很高的灵敏度、速度、准确度和简单性来表征感兴趣的分子，是监测蛋白质纯化、优化样品、研究蛋白质功能和相互作用的理想仪器。所有测量都可在各种各样的天然缓冲液中逐个分子地完成，无需标记装饰，就可以直观地解释质量分布结果。 

质量光度仪分析仪器的特点：

· 准确表征样品的天然属性；

• 保持结构完整性和活性； 

测量只需要几微升的样品；

• 设计紧凑的台式仪器，无特殊安装要求；

• 软件自动控制采集过程，并在几分钟内进行质量分析；

• 直观地解释质量分布的结果，而不需要任何经验和知识；

• 准确测量在溶液（而不需真空）中的蛋白分子质量；

• 单分子分析，可靠区分样品中所有已知和未知组分，高精度捕获高丰度和低丰度分子；

• 快速、简单、最小样本量：纳米浓度下的微升样品体积，几分钟内获得结果，宽质量范围和高动态范围；

质量光度仪分析仪器应用领域  ：

样品纯度和成分分析 Sample characterization  

异质生物分子的质量分析测量 Protein oligomerization

生物分子间相互作用 Biomolecular interactions

蛋白质复合物的组装与化学计量 Macromolecular assemblies

质量光度法的技术路线：

质量光度法（一）-iSCAT法观察单个分子

质量光度法（二）-SNR分析处理

质量光度法（三）-分子计数

质量光度法（四）-对比分子量转换

质量光度仪TwoMP分析仪器的特点：

紧凑的台式仪器，安装要求低——测量只需要几微升的样品、和干净、高质量的盖玻片，几分钟内可获得结果；

直观高效——Refeyn的软件自动控制采集过程，并在几分钟内完成质量分析。您可以直观地解释质量分布结果，而无需任何先验知识；

的精确性——由于其高灵敏度，非常适合在生理（低）浓度下进行测量，而单分子计数技术固有的高动态范围确保低丰度分子仍能被准确捕获。质量光度法能轻松量化不同种类的蛋白质分子，具有高分辨率和重复性；

性能参数

原理：干涉光散射，无需标记

质量范围：30kDa – 5MDa

测量精度：±2% @ 10 nm

单次测量质量误差：±5% @ 10 nm

分辨率（FWHM）：25kDa @ 66kDa，60KDa @ 660 kDa

浓度范围：100pM - 100nM（粒子浓度）

灵敏度：< 1ng蛋白质

样品体积：5 - 20 μ l

帧率（标准设置）：1 kHz（原始），100 Hz（集成）

视场：4 x 11µm （@ 500 Hz）至12 x 17µm（@ 135 Hz）

波长：488 nm

像素尺寸：12nm