为帮助大家能更深入了解深层过滤，现已正式上线《深思熟“滤”》系列性深层过滤知识课堂，今天为大家带来本系列第三篇内容。
在前几期《深思熟“滤”》系列性深层过滤知识课堂中我们向大家介绍了深层过滤技术，欢迎点击了解。
本文将围绕在生物医药行业主要接触的细胞类型以及深层过滤技术的应用展开，因内容较多，因此分为上下两篇来具体阐述，本文为上篇。
深层过滤介质的内部有着复杂交错的结构，所以可以将杂质拦截在内部网络中，从而能去除细胞碎片而保留例如蛋白质等大分子物质等目的产物，故而深层过滤技术被广泛用于疫苗、抗体、血液制品、重组蛋白、抗生素生产等。
| 深层过滤器在生物医药行业主要接触的细胞类型
采用了深层过滤技术诞生的深层过滤器产品在生物医药行业有着普遍的应用，主要在于料液的澄清和除杂。
在抗体和疫苗行业(包含人用抗体和动物疫苗等)，主要为细胞发酵液的澄清，发酵后期的细胞处于衰变期，内部产生的目的蛋白已经基本形成，细胞破碎释放出目的蛋白并且产生大量细胞碎片，此时需要采用深层过滤器尽可能多的除去杂质(主要是HCPs和DNA)而尽可能多的保留目的蛋白(一般客户要求过滤前后蛋白损失率低于10%)。
那么细胞发酵行业中应用深层滤器较多的细胞类型有哪些呢？上篇在此针对CHO细胞及293细胞展开：
CHO细胞
CHO(Chinese hamster ocary，中国仓鼠卵巢细胞)是细胞生物技术产业化的细胞系，目前70%以上的细胞治疗性抗体蛋白都是由CHO细胞产生的。
批准正式应用于人类疾病治疗或疾病预防的基因工程产品约有三十多种，其中只有一种(乙肝疫苗)是由酵母菌生产的，其余所有产品都是由CHO细胞和大肠杆菌生产的，大肠杆菌不能形成有活性的二聚体(如白介素2)，也不具有糖基化的功能(如EPO)，而CHO却具有如上的功能，因此CHO成为表达复杂生物大分子的理想宿主。其中CHO-K1细胞系为其常用系，是野生型细胞系。
应用CHO细胞进行抗体发酵生产的好处主要在于：
✓更适用于悬浮培养(也可进行贴壁生长)，可以满足大规模工业生产重组蛋白的要求
✓对蛋白质进行糖基化，其糖型与人类基本一致，更接近天然抗体分子
✓不易传播人类病毒，比其他哺乳细胞基因组更容易进行改造和拓增
✓遗传背景清楚、转染效率高、可长期稳定传代并稳定表达有功能活性抗体
✓利于抗体纯化：为成纤维细胞，非分泌型，本身很少分泌内源性蛋白
✓可用无血清培养基进行培养
| 案例研究——两步深层法除杂澄清料液
有一项目采用培养CHO-K1细胞作为宿主细胞来制备单克隆抗体。一般CHO-K1细胞发酵液内容物较为复杂(浊度一般大于2000NTU)，除目标产物外，还含有大量细胞碎片(如HCPs和DNA等)，一般采用离心后加一步深层或者两步深层的方式进行除杂澄清。
我们采用两步深层的方式除杂澄清，其料液其结果如下表：
由上表可见，应用LeClafine®对相关料液进行过滤，有较好的除杂效果，且回收率也满足客户需求。
表1：一级过滤数据图表
表2：二级过滤数据图表
*本次实验数据仅供参考，如有测试需求请联系乐纯生物技术支持部门。
除CHO-K1细胞外。目前深层滤器LeClafine®在293细胞、BHK细胞、MDCK细胞等发酵液及大肠杆菌裂解液的除杂澄清过程中均有应用，将在后文中介绍。
乐纯生物LeClafine®深层过滤器
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