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Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit 逆转录
产地 | 国产 | 级别 | 其他 |
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产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 |
HRbio™ miRNA cDNA Synthesis Kit(Stem Loop) HRbio™ miRNA逆转录试剂盒(茎环法) | HRF0703 | 50 T |
产品描述
miRNA链cDNA合成试剂盒是采用茎环法原理的专用试剂盒, 5×Reaction Mix为一管式反转录预混液,含有反转录所需的所有试剂(反转录酶、RNase Inhibitor、dNTPs、Buffer),只需加入模板RNA和茎环引物即可进行反应,使得cDNA的合成更加的方便快捷。
本试剂盒中使用了具有DNA分解活性的特殊gDNA Remover,不需要中途开盖添加,只需一步操作,即可同时完成基因组清除与逆转录反应,大大的简化了操作步骤,避免了繁杂的加样过程对样品造成的污染和RNA的降解。本试剂盒的反转录酶具有的热稳定性,经过特别优化的缓冲体系,限度保证各种miRNA特异性逆转录产物的合成。同时产物cDNA的兼容性好,可以适配市面上主流的荧光定量mix做下游检测试验。
miRNA逆转录试剂盒(茎环法)
产品组分
组分 | HRF0703 |
5×Reaction mix | 200 μL |
gDNA Remover | 50 μL |
RNase free H20 | 1.5 mL |
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存,有效期1年。
注意事项
1)尽量避免RNase对样品的污染;
2)为保证逆转录的成功,请尽量获得高质量的RNA样品;
3)5×Reaction mix和gDNA Remover含有甘油,比较粘稠,溶液易挂壁和吸附在移液枪头外导致产品损耗,因此,在使用前请点甩离心后使用,同时使用低吸附移液枪头;
4)5×Reaction mix和gDNA Remover所包含的酶均足够量。即使每次5×Reaction mix只用3.6μl或0.8μL的gDNA Remover都不会对使用效果造成影响。
5)本产品仅作科研用途!
使用方法
一、茎环法miRNA链cDNA合成(以20 μl反应体系为例,可使用10μL体系)
1.使用前将每种溶液轻弹或者轻微涡旋振荡混匀,可简短离心以收集残留在管壁的液体到管底。
2.在无RNase管里面加入以下成分:(建议使用PCR管冰上配制,置PCR仪反应)
组分 | 体积 |
Total miRNA | ≤2μg* |
Stem-loop primer(2μM) | 1μL |
5×Reaction mix | 4μL |
gDNA Remover | 1μL |
RNase free H20 | 补足到20μL |
* 在反应中使用的total miRNA 必须包含有小分子RNA(miRNA)。此过程也可以使用富集的miRNA, 单miRNA无法直接用分光光度计定量,建议直接加入2μl ~5μl。可根据目的miRNA丰度决定加入量,但是对于低丰miRNA 样品而言(如血清血浆提取物),可直接加入体积8 μl。
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