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游经理
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上海市闵行区莘建东路158号绿海大厦B座8F
编:
200110
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https://www.zyzhan.com/st31116/
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多肽的保存使用说明

2013-1-10  阅读(444)

  多肽的保存使用说明
  
  多肽是α-氨基酸以肽链连接在一起而形成的化合物,它也是蛋白质水解的中间产物。由两个氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫做二肽,同理类推还有三肽、四肽、五肽等。通常由10~100氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫多肽。它们的分子量低于10,000Da(Dalton道尔顿),能透过半透膜,不被三及硫酸铵所沉淀。也有文献把由2~10个氨基酸组成的肽称为寡肽(小分子肽);10~50个氨基酸组成的肽称为多肽;由50个以上的氨基酸组成的肽就称为蛋白质。
  
  特点
  
  传统获得肽的方法有很多。传统法主要有:酸法、碱法、电法、人工嫁接法、基因表达法等。但在工艺技术方面,这些合成工艺方法的局限性,是导致其这些合成方法没有产品的原因。
  
  多肽保存:
  
  大多肽在-20℃很稳定,特别是冷冻干燥并保存在干燥器中,在将它们暴露于空气之前,冷冻干燥多肽可以放于室温。这将是湿度影响减少,当无法冷冻干燥时,的方法是以小的工作样量存放。
  
  对于含Cys,MetorTrP的多肽,脱氧缓冲剂对其溶解*,因为这种多肽可易空气氧化,在封瓶前,慢慢流过多肽的氮气或氩气也会降低氧化作用。含Gln或Asn的多肽也容易降解,所有这些肽与不含这些有问题解苷的那些肽相比,生命期有限。
  
  溶解性:
  
  大多肽的道选溶剂是超纯抽气水。人C多肽试剂盒稀乙酸或氨水分别对于碱性或酸性多肽的溶解很重要。这些方法不溶的多肽,需要DMF、脲、guanidiniamchloride或acetonitnle来溶解,这些溶剂可能某些实验有副作用。所以我们建议设计多肽时要加注意。
  
  残基Ala,Cys,Ile,Leu,Met,Phe和Val将全增加多肽的溶解难度。
  
  您需要特殊的多肽或任何技术帮助,请随时与我们。我们包你*满意,对于我们不能适当合成的顺序,我们不收费。
  
  多肽的保存和操做
  
  包装1mg或更少的多肽按净重包装,声明的小瓶重不含相关抗离子和水。例如,氨基酸分析决定的肽含量是80%,在1mg样品中,那么瓶中毛重是1.25mg。
  
  大量的多肽以毛重算。标出的重量含相关抗离子和水,例如,25mg样品中肽百分比为90%,那么,实际肽量为25mg×90%=22.5mg
  
  不要把肽含量和纯度搞混了。肽的纯度可能是100%,而肽含量相关带电基团(如Arg,Lys)的抗离子量和肽新水性决定。这是合成肽的本身特性。
  
  冻干肽的保存
  
  所有产品应存于冰箱,为-20℃。多数肽以此方法可以存放几年不变。
  
  肽溶液的保存
  
  溶液肽远比冻干形式不稳定,溶液应为中性pH(pH5-7),-20℃保存的,为避免样品的反复冻融,分成小样存放。一份样品融冻后未用完,应扔掉,细菌降解有时会成为溶液肽的麻烦,为克服此,肽应溶于无菌水,或肽溶液用0.2μM滤膜过滤。
  
  多肽的重建和操作
  
  多数肽溶于无菌蒸溜水。初次溶解时,要注意使初始浓度比要求浓度大,如果多肽仅有限溶解性,这便允许加入其它溶解剂或缓冲盐。
  
  如果多肽在水中的溶解性有限,有几种选择可帮助溶解:
  
  对碱性肽用稀乙酸(含Arg,Lys,His)
  
  酸性肽用稀氨水(含Asp,Glu)
  
  对极疏水的肽用10%有机修饰物(Acetonitnile,Methanol)
  
  极不溶的肽用DM50或DMF
  
  guaniclinehydrochloride或脲的浓溶液也很有用,人多肽YY(Peptide-YY)ELISA试剂盒与上述方法合用,声处理也是溶解多肽的有效手段。
  
  多肽的包装
  
  目录中所有多肽除特别说明外,纯度为95~98%。包装为小瓶冻干粉。除特别注明外,多肽净重包装,例如,1mg瓶的β-amyloid1-40含1mg的多肽。多肽净重由氨基酸分析得到的肽含量计算。例如,一个多肽样品毛重5mg,氨基酸含量85%,多肽净重为5mg×0.85=4.25mg。请注意,多肽含量不是多肽纯度,与抗离子象乙酸盐和溶剂,特别是水结合量合成多肽的本身特性。多肽纯度可能达100%,但合成品中多肽含量由氨基酸组成,硫水性,和多肽对溶剂和离子的暴露决定,特别是在纯化过程中,无论多肽如何纯,冻干粉多肽含量一般为70-85%。剩余15-30%由其它基本非肽成份构成。
  
  多肽应用和保存
  
  多肽具广泛的溶解性。多肽不溶的主要问题是形成二级结构。除了zui太肽外,这点都会发生,在有多重疏水残基的肽中更显著。盐会促进二级结构形成。我们建议先在无菌蒸馏水或去离子中溶解多肽。如需要增加溶解率,可用声处理。溶解仍有问题,加少量稀乙酸(10%)或氨水,会便于溶解。
  
  要长期保存多肽,冷冻干燥,冷干粉可在-20℃或更低存放几年而很少或无降解。溶液中的多肽远不稳定。多肽易受细菌降解,应用无菌纯化水溶解。
  
  含有Met,Cgs或Try残基的多肽溶液由于氧化,寿命有限。应溶于无氧溶剂,为防止重复冻融的破坏,建议溶解过量的肽的便实验,其余多肽以固体形成保存。
  
  固相多肽合成Fmoc方法
  
  任何多肽链的关键连接为肽键,由一个氨基酸的氨基与另氨基酸的缩合形成。通常一个氨基酸由一个中心碳原子组成,它由四个基它基团包围:氨基、羰基、基和侧链。侧链,称为R,区别不同氨基酸的结构。某些侧链含有干扰肽键形成的功能团。因此侧链功能团的封闭很重要。
  
  图工显示了Fmoc合成的一般流程,首先*个Fmoc氨基酸通过一个酸性接头接到不溶载体树脂上,Fmoc去保护通过用碱处理树脂来完成,一般是Poperidine。用预先激活或原位激活连接第二个Fmoc氨基酸。要求总多肽合成后,通过TFA分离来除去树脂和去保护。
  
  Fmoc分离
  
  固相多肽合成中多肽分离主要用酸解
  
  Fmoc法用弱酸,比如TFA或TMSBr。各种添加剂,一般为thiolcompound,水和酚,用来保护多肽的免分离中Carbocation的破坏。


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