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肿瘤早期筛查黑科技--第四代循环肿瘤细胞仪

阅读:1103      发布时间:2021-3-18
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循环肿瘤细胞(CTC)是从肿瘤病灶脱落并播散到血液中的肿瘤细胞,能够有效提示体内肿瘤的存在,是肿瘤转移的重要途径。肿瘤的高致死率主要由于肿瘤细胞具有转移和侵袭能力,约90%肿瘤病人的死亡源于肿瘤的转移。

 

早期的治疗干预将有效提高治疗效果,因此CTC检测具有丰富的临床诊疗价值,如肿瘤早期筛查、肿瘤辅助诊断、个体化治疗、实时监测疗效、耐药性检测、肿瘤预后评估、复发转移检测等。

 

早期诊断和治疗对于提升肿瘤病人生存率具有至关重要的意义。但是CTC标本稀有,难以有效获取。1ml血液中大约有5*109个血细胞,而CTC的含量往往只有1-50个。高纯度、高灵敏性、快速、高细胞活性的CTC分选富集是CTC临床应用的重点和难点。

目前CTC分离方法主要有以下几种:1、密度梯度离心2、基于生化特性的免疫磁珠分离3、膜过滤4、微流控芯片法分离。

1、密度梯度离心。由于同类肿瘤细胞具有接近的浮力密度,且该浮力密度与血液中的其他血细胞不同,所以设置不同的浓度梯度,也可以将肿瘤细胞加以分离。这种方法操作简单,但肿瘤细胞可能会在血浆层有所残留,而且可能被红细胞等粘附,误差较大。所以仅靠此方法分离肿瘤细胞,检测准确度较低,适合作为肿瘤细胞的初级分离。

2、基于生化特性的免疫磁珠分离。免疫磁珠分离根据结合的靶细胞是CTC还是白细胞,可分为阳性富集法和阴性富集法。阳性富集法主要利用特异性抗体磁珠与肿瘤细胞表面抗原进行特异性结合来富集CTC。阴性富集法也称白细胞去除法,通常用识别CD45CD14的特异性抗体与白细胞结合,从而去除全血中的白细胞。例如阳性富集法中,CellSearch技术是利用连接EpCAM抗体的磁性珠子与肿瘤细胞发生特异性结合,通过免疫磁性分离。但CellSearch技术在多个研究报道中敏感性不一,且无法分离活体CTC,降低了其在临床的使用价值,2016年初已停产。

3、膜过滤。用特定孔径的膜进行CTC与正常细胞的分离,其简单地定义了CTC是大细胞,漏检小粒径肿瘤细胞尤其是肿瘤干细胞,而为了提高捕获效率,则会残留大量的背景细胞,对鉴定造成较大的难度。

4、微流控芯片法。根据肿瘤细胞的病理学定义核质比显著高于正常细胞,采用基于细胞刚性程度、尺寸等物理特性的微流控芯片法。基于细胞大小和变形性差异分选CTC的优势在于:操作过程简单,捕获效率高,能够实现高通量富集,无需依赖表面标志物,分选出的CTC可以用多种抗体进行标志物鉴别。

国初科技(厦门)有限公司大力推广的新一代CTC分离技术——微流控芯片法,可实现CTC的快速、高纯度、高灵敏度富集。新一代CTC分选技术根据肿瘤细胞形态学设计,采用确定性侧向位移流体力学原理,可实现分离过程无需红细胞裂解、无需分离白膜层、无需抗体标记、保持细胞完整活性。肿瘤细胞在微流环境中损伤小,分选后细胞的存活率更高,可继续培养和做后续分析。打开CTC下游分析的无限可能。

基于确定性侧向位移设计的微流控芯片原理是芯片内具有相对于流体流动方向呈一定角度的微柱阵列,尺寸不同的颗粒在流动过程中具有不同的运动轨迹,在芯片上设计相应的出口,即可收集到相应的细胞。新一代CTC分离技术具有以下优点:

● 高回收率>95%                                 ● 自动化操作,无需专业人员

● 红细胞去除率≈100%                        ● 时间短,全程仅需20分钟

● 白细胞去除率>99.9%                      ● 上样量只需5ml全血

 

国初科技(厦门)有限公司还销售多种CTC检测试剂,采用的是免疫荧光染色法,检测速度快、灵敏度高,细胞形态可见。可用于上皮型CTC/CTM鉴定、间质型 CTC/CTM鉴定、PD-L1表型CTC/CTM鉴定、干细胞型CTC鉴定等。

 

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