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详细介绍
EZ Trans细胞转染液（24765）
产品名称 | 货号 | 规格 | 保存 | 价格(元) |
EZ Trans细胞转染液（24765） | C4058L1090 | 1mL | 4℃ | 300 |
产品描述
EZ Trans细胞转染液（核心成分为线性聚乙烯亚胺，也称作LPEI），是新一代的转染试剂，带正电的聚合物与核酸带负电的磷酸基团形成带正电的复合物后与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用，并通过胞吞作用进入细胞。除了具有阳离子脂质体（如：Lipo2000,3000）的转染效率高，操作简单，适用范围广，重复性好等特点外，经李记生物优化处理，还具有在体内，转染效率高，细胞毒性低等特点。
EZ Trans（货号：C4058L1090）核心成分Polyethylenimine HCl MAX, Linear, Mw 40,000（PEI Max 40,000）, PEI Max 40,000是线性化聚乙烯亚胺PEI 25,000的升级产品，不同之处在于1）*水解（去乙酰化）；2）比PEI25，000的盐酸盐形式，具更高的水溶特性；3）含更长连续性乙烯亚胺（ethyleneimine）片段，其质子化氮水平比PEI 25,000提高11%以上。Thomas M，et al（2005）研究数据表明，去乙酰化的PEI 40,000（Polyethylenimine MAX 40,000）体外质粒DNA转染效率提高21倍，小鼠体内靶向效率达到10,000倍，肺部特异疗效显示增强1500倍。本品经碱中和后，可转化为线性化自由胺（PEI），此时分子量正相当于25,000。PEI 23966与PEI 24765在转染不同细胞及DNA时是各有优势，李记生物提供的EZ Trans细胞转染液（C4058L1080，C4058L1090）核心成分PEI经过优化，显著降低了细胞毒性。
使用方法
1. 接种细胞：用胶原酶消化细胞并计数（不建议用胰酶）。转染前 18-24 小时进行细胞的铺板，以便在转染时，贴壁细胞的密度大约在 80%左右。注：培养液中的血清和抗生素不影响转染效率。
2. 准备 EZ Trans-DNA 复合物
1）转染前将所有试剂置于室温 10 分钟。下面，以转染 24 孔板培养皿为例，说明转染的具体方法（如果在别的培养器皿中进行转染，各试剂建议使用量见表 1.：
2）将 1 μg 质粒 DNA 稀释到 40 μL 无血清的高糖 DMEM 培养基，用移液枪吹吸 3-4 次。
3）将 3 μL EZ Trans 转染试剂稀释到 40 μL 无血清的高糖 DMEM 培养基，用移液枪吹吸 3-4 次。
注： 无血清的高糖 DMEM 培养基是稀释液， 不能使用含血清的培养基（ 包括 Opti-MEM） 进行 DNA 和 EZ Trans 转染试剂的稀释！因为 EZ Trans-DNA 转染复合物的形成过程不能含有血清。
4）将稀释好的 EZ Trans 转染试剂一次性全部加入到已稀释好的质粒 DNA 中，立即用移液枪吹吸 3-4 次。
注： 此混合的顺序不能反向进行！
5）室温放置 10-15 分钟，以形成 EZ Trans-DNA 复合物。
表1：不同培养体积对应的待转DNA、EZ Trans、稀释液用量
培养器皿 | 培养液体积（mL） | DNA量（μg） | EZ Trans (μL) | 稀释剂(μL) |
48孔板 | 0.3 | 0.5 | 1.5 | 2 × 25 |
24孔板 | 0.5 | 1 | 3 | 2 × 40 |
12孔板 | 0.75 | 1.5 | 4.5 | 2 × 60 |
6孔板 | 1 | 3 | 9 | 2 × 125 |
35 mm培养皿 | 1 | 3 | 9 | 2 × 125 |
60 mm 培养皿 | 3 | 6 | 18 | 2 × 250 |
100 mm 培养皿 | 9 | 12 | 36 | 2 × 500 |
3. 转染细胞
1）将上述 80 μL EZ Trans-DNA 转染复合物均匀滴入到含细胞的培养皿中。轻轻晃动培养皿或轻微涡旋，让 EZ Trans-DNA复合物分散均匀。
2）在 CO2 培养箱中 37℃下孵育细胞，转染后 12-18 小时，去除含 EZ Trans-DNA 复合物的培养液。（若细胞形态欠佳，可在转染 3-5h 后，添加 1/2 体积的包含 30%血清的生长培养基，在转染 12-18 小时后*去除含 EZ Trans-DNA 复合物的培养液，用含血清和抗生素的新鲜培养液。）
3）转染后zui快 7h 即可检测到转入基因的表达，可根据需要在 24-48 小时内检测转染效率。
注： 筛选稳定转染细胞株， 可在上述操作后（ 转染细胞 24 小时后） ， 将细胞传代至新鲜的生长培养基中（ 将细胞稀释 10 倍 以上） ， 在 CO2培养箱中 37℃孵育过夜。 在有转染抗性基因相匹配的药物筛选条件下， 约 1～2 周可筛选到耐药性克隆， 在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。
运输与保存方法
常温运输，4℃保存，保质期12个月。
使用注意事项
质粒质量：请务必使用高质量转染级无内毒素质粒。通过260 nm光吸收测定DNA 浓度，260nm / 280nm比值确定 DNA 纯度（比值应该在1.8～2.0的范围之内）。如有可能，请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。
细胞条件：使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞，请在转染前至少传代两次。建议使用GIBCO或者李记生物的胎牛血清培养细胞。„
特别提醒
1. 对于某些类型的细胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 细胞，在转染前两天铺板可显著提高转入基因的表达水平。如果选择转染前两天铺板，可适当降低铺板密度，以确保转染时细胞的汇合度仍为70～80%。
2. 对于接触抑制敏感的细胞，可适当降低铺板密度。
3. 即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情况下，DNA-PEI复合物仍能转染细胞，但是DNA-PEI复合物必须在无蛋白存在的条件下形成。
4. 对大多数细胞来而言，每 1μg DNA 使用 3.0μL EZ Trans试剂都能获得较高转染效率。使用者也可尝试每 1μg DNA使用 1～4μL体积线性PEI转染试剂进行优化。
EZ Trans转染液用于不同细胞转染时用量参考（以96孔板为例）
细胞型号 | 培养基 | 每孔细胞数 | DNA的量 | 转染试剂量 |
293H | DMEM | 3×104 | 0.2µg | 0.5µL |
293FT | DMEM | 3×104 | 0.2µg | 0.5µL |
293E | DMEM | 3×104 | 0.2µg | 0.5µL |
293F | DMEM | 3×104 | 0.2µg | 0.5µL |
COS7 | DMEM | 1.5×104 | 0.4µg | 0.5µL |
hela | DMEM | 2×104 | 0.3µg | 0.5µL |
Caco2 | MEM | 3.5×104 | 0.3µg | 0.75µL |
BHK21 | MEM | 2×104 | 0.2µg | 0.5µL |
CHO-DG44 | DMEM+HT+pro | 2×104 | 0.5µg | 0.5µL |
RAW264.7 | DMEM | 3×104 | 0.2µg | 0.5µL |
MCF7 | MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium pyruvat | 2×104 | 0.1µg | 0.25µL |
SW480 | IMDM | 3×104 | 0.4µg | 0.5µL |
MDCK | DMEM | 4×104 | 0.6µg | 1µL |
CHO-K1 | IMDM+Pro | 3×104 | 0.2µg | 0.5µL |
HepG2 | DMEM | 3×104 | 0.5µg | 0.75µL |
A549 | DMEM | 2×104 | 0.3µg | 0.5µL |
NIH/3T3 | DMEM | 1.5×104 | 0.1µg | 0.75µL |
vero | DMEM | 3×104 | 0.3µg | 0.75µL |
sf9 | SIM SF | 5×104 | 0.4µg | 0.75µL |
附：几种细胞转染方法比较
几种细胞转染方法（试剂）特点比较表
转染方法 | 原理 | 主要应用 | 特点 |
阳离子聚合物 | 带正电的聚合物与核酸带负电的磷酸基团 形成带正电的 复合物后与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用，并通过胞吞作用进入细胞。 | 稳定转染 瞬时转染 所有细胞 | 除了具有阳离子脂质体的转染效率高，操作简单，适用范围广，重复性好等特点外，还具有在体内，转染效率高，细胞毒性低等特点，是新一代的转染试剂。 |
阳离子脂质体法 | 带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物，然后脂质体上剩余的电核与细胞膜上的唾液酸残基的负电 核结合；另一种解释是通过细胞是内吞作用而被进入细胞。(若DNA浓度过高，中和脂质体表面电核，而降低了与细胞的结合能力) | 稳定转染 瞬时转染 所有细胞 | 使用方法简单，可携带大片段DNA，通用于各种类型的裸露DNA或RNA，能转 染各种类型的细胞，没有免疫原性。虽在体外基因转染中有很高的效率，但在体 内，能被血清清除，并在肺组织内累积，诱发强烈的抗炎反应，导致高水平的毒性，这在很大程度上限制了其应用 |
DEAE-葡聚糖法 | 带正电的DEAE-葡聚糖与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内吞 | 瞬时转染 | 相对简便、重复比磷酸钙好,但对细胞有一定的毒副作用,转染时需除血清且一 般只用于BSC-1,CV-1,COS细胞系 |
磷酸钙法 | 磷酸钙DNA复合物吸附细胞膜被细胞内吞 | 稳定转染 染瞬转染 | 不适用于原代细胞（所需的DNA浓度较高）,操作简 便但重复性差,有些细胞不适用细胞建议用CSCL梯度离心，转染是拷贝数较多 |
逆转录病毒(RNA) | 通过病毒中膜糖蛋白和宿主细胞表面的受体相互作用而 进入宿主细胞，之后反转入酶 启动合成DNA并随机整合到宿主基因组中 | 稳定转染 特定宿主细胞 | 可用于难转染的细胞、原代细胞，体内细胞等,但携 带基因不能太大（<8kb）, 细胞需处分离期,需考虑安全因素 |
腺病毒 (双链 DNA) | 先和细胞表面的受体结合，继而在αv整合素介导下被细 胞内吞 | 瞬时转染 特定宿主细胞 | 可用于难转染的细胞,需考虑安全因素 |
Biolistic颗粒传递法 （基因枪粒子轰击法） | 将DNA用显微重金属颗粒沉 淀，再将包被好的颗粒用弹道 装置投射入细 胞，DNA在胞内逐步释放，表达 | 瞬时性转染 稳定转染 | 可用于：人的表皮细胞， 纤维原细胞，淋巴细胞系以 及原代细胞 |
显微注射法 | 用显微操作将 DNA直接注入靶细胞核 | 稳定转染 瞬时转染 | 转染细胞数有限,多用于工程改造或转基因动物的胚胎细胞 |
电穿孔法 | 高脉冲电压破坏细胞膜电位，DNA通过膜上形成的小孔导入 | 稳定转染 瞬时转染 所有细胞 | 适用性广，除了质粒外，还可转染大的基因组 （>65kb）但细胞致死率高， DNA和细胞用量大， 需根 据不同细胞类型优化电穿孔实验条件，拷贝数较少 1-20 |
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