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详细介绍
2 × Taq PCR Master Mix
产品名称 | 货号 | 规格 | 保存 | 价格(元) |
2 × Taq PCR Master Mix | D1101L1146 | 1 mL | -20℃ | 200 |
| 2 × Taq PCR Master Mix | D1101L1147 | 5 x 1 mL | -20℃ | 850 |
产品简介
2 × Taq PCR Master Mix是即用型的常规PCR预混合溶液，含有Taq DNA Polymerase、dNTP混合物、MgCl2以及优化的缓冲体系，它以2×的浓度形式存在，反应时只需加入所需引物和模板，用水稀释即可立刻配制完PCR体系。本产品中含有PCR产物具有3’-dA突出端，可轻松克隆至T载体。
运输与保存方法
冰袋运输。收到产品后放到-20 ºC保存，有效期12月以上。
使用方法
1. 反应体系配制（50μl）：
模板DNA | optional |
引物1（10 μM） | 2 μL |
引物2（10 μM） | 2 μL |
2× PCR Master Mix (With Dye) | 25μL |
ddH2O | up to 50μL |
注：针对不同模板的*反应浓度有所不同，下表为50μl反应体系*模板使用量，仅供参考。
人基因组DNA | 0.1～1 μg |
大肠杆菌基因组DNA | 10～100 ng |
λDNA | 0.5～5 ng |
质粒DNA | 0.1～10 ng |
2. PCR循环反应条件
94℃ | 5 min（预变性） | |
94℃ | 30 sec | 35个循环 |
55℃* | 30 sec | |
72℃ | 30 sec | |
72℃ | 7 min（*延伸） | |
注：退火温度需要根据引物的Tm值调整，一般设置成低于引物Tm值1-2℃即可。
注意事项
1.由于Taq DNA Polymerase室温下也有一定的反应活性，PCR反应体系配制需在冰上进行。体系混匀后快速置于PCR仪进行反应。这样可以减少反应准备阶段的非特异扩增，有助于得到更好的PCR结果。
2. 引物设计注意事项
2.1 引物3’端zui后一个碱基选择C或G，端zui后8个碱基应避免出现连续错配；端尽量避免发卡结构的出现；
2.2 引物Tm值控制在55℃-65℃之间；
2.3 引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
2.4 引物GC含量控制在40%-60%之间；
2.5 正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能*。
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