重细节改工艺

重细节改工艺 严防注射用生物制剂内毒素污染
 生物制剂包括细胞团子、重组蛋白质药物、抗体、疫苗和寡核苷酸药物等，其剂型多为注射剂，因此对其进行热原控制非常关键。在生产过程中，表达系统、原辅材料、生产环境以及个人操作等诸多因素都可能造成产品内毒素污染。对于生物技术药物内毒素污染的预防与去除应从两个层面考虑：一是在生产过程中，严格按GMP要求进行生产，并将目标蛋白的纯化与内毒素的去除结合起来；一旦产品出现内毒素污染，则要针对具体情况选择不同措施来去除内毒素。

    ■注重生产各环节 防止内毒素污染

    在注射用生物制剂的生产过程中防止内毒素污染，涉及生产设备、过滤介质、生产器具、厂房等诸多因素。如在精制纯化中，生产车间必须是符合GMP要求的洁净厂房，各种不同的操作要在不同的洁净区内分别进行。发酵和粗纯应该在十万级洁净区进行，精纯在万级洁净区域内进行，制剂、分装须在百级间或层流罩下进行。对于任何非封闭系统的操作，均应采取无菌操作方式，如果系统自动化程度较高，可遥控操作或较少手工操作。对于任何直接接触制品的溶液、容器、生产用具、管路、生产系统等，必须进行严格、有效的处理，以去除热原。另外，用蒸馏法或反渗透法制备的新鲜注射用水或灭菌注射用水必须是无热原的，这是清洗器具及配制溶液的基础。

    对于玻璃器皿、不锈钢制品等生产器具，可将其置于180℃下、3～4小时或250℃下、1～2小时干烤，以除去热原。对于橡胶、塑料制品（如胶塞、胶管等用品），可采用0.1摩尔/升的盐酸煮沸30分钟，或用0.1摩尔/升的*浸泡4小时以上，急用时可煮沸30分钟，然后用新鲜用水冲洗净，再进行高压灭菌。另外，对于注射型生物制剂的某些关键生产步骤，可采用无菌、无热原的一次性器具，这样既可以减少工作步骤，又可防止清洗不净带来污染。

    溶液的配制要使用无热原的新鲜注射用水，整个过程必须于3小时内完成，并及时进行高压灭菌。对于一些不能进行高压灭菌的溶液，可通过超滤法除热原。如磷酸盐缓冲液在高压灭菌时会产生具有紫外吸收的焦磷酸，这样在使用磷酸盐缓冲液进行柱层析时，就会对层析图谱造成干扰，在干扰素的生产与检定中就曾经出现过这样的情况，对此采用超滤膜可有效地去除溶液中的热原。

    在注射用生物制剂的生产中，对于系统、管路的清洗涉及原位清洗/原位杀菌（CIP/SIP），即主要针对泵、管道、阀门、滤器、柱、各种罐等进行定期清洗杀菌，常规要求在不拆卸任何组件的情况下原位进行。例如对于生物制剂生产中zui普遍使用的单元操作——层析，原位清洗/原位杀菌十分重要。有效的原位清洗可以减少产品污染、维持柱效和提高介质寿命。由于新一代的凝胶具有较高的物理化学稳定性，可以使用较高浓度的*进行原位清洗。对于离子交换或疏水层析介质（如CM-SepharoseFF），可使用1摩尔/升的*反向清洗一个柱床体积，如果每使用3次介质清洗1次，可使介质使用寿命达1000次；对于凝胶过滤介质（如Sephacry1等），可使用0.5摩尔/升的*清洗半个柱床体积，接触1～2小时，如果每使用5次介质对其清洗1次，可使介质使用寿命达到800次。在白蛋白的纯化流程中，对SephadexG-25C的原位清洗可采用0.5摩尔/升的*清洗0.2个柱床体积，每使用4次清洗1次，介质使用寿命可达7200次。

中国医药报