免疫酶染色试验、免疫荧光试验诊断猪瘟

　　免疫酶染色试验
　　
　　用酶标抗体直接检测病猪组织中的病毒抗原。感染猪瘟的肾脏皮质部细胞被染成深褐色。应用内含o．01％*或o．01％叠氮钠溶液的抑制内源性酶，取得较好效果
　　
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　　采病猪扁桃体、脾、肾、淋巴结等病样做压印片或冰冻切片，标本自然干燥后，在2％戊二醛和甲醛等量混合液中固定10rnin。干燥后，将标本浸入0．01％*或0．01％叠氮钠溶液的Tris-HCI缓冲液中，室温下作用30rain。用pHL40．02mol／L磷酸盐缓冲液漂洗5次，每次3min，然后风干。将标本置于湿盒内，滴加1：10酶标记抗体，37~C下3min：用pH7．40。02mol／L磷酸盐缓冲液冲洗3～4次，每次2～3min，再用无水乙醇、二甲苯脱水，封片检查。结果判定：用显微镜检查，如细胞呈深褐色为阳性；黄色或五色则为阴性。猪瘟兔化弱毒接种的猪组织细胞浆呈微褐色，与强毒株感染有明显区别。
　　
　　免疫荧光试验
　　
　　可分为直接免疫荧光和间接免疫荧光试验。
　　
　　组织直接免疫荧光试验采集病变典型的可疑组织或脏器，用石蜡包埋后切片或冷冻后用冰冻切片机切成薄片，室温下用丙酮固定lOmin并风干组织片，之后用PBS冲洗组织片，抗体孵育（间接荧光分两步进行，直接荧光为一步），PBS再次冲洗组织片，风干后在荧光显微镜下观察荧光染色结果。该方法优点：不需采集大量病变实质组织，操作简单。缺点：特异性和敏感性低，主观性强。
　　
　　间接免疫荧光试验在病猪组织上滴加1：4抗猪瘟阳性血清，作用30mln后洗涤再加羊抗猪IgG荧光抗体，作用30min后，漂洗、干燥、镜检。优点：操作简便，诊断迅速。缺点：成本昂贵，特异性差，主观性强，需有经验的检验员操作，以区分好非特异性染色。