PCR法检测猪链球菌病

　　（1）PCR法Smith等针对猪链球菌主要致病菌株利用荚膜生物合成基因的DNA序列特性建立了血清型特异性PCR鉴定方法。他们设计了3对引物：
　　
　　CPS2Jprimers5’-CAAACGCAAGGAATTACGGTATC-3’，
　　
　　CPS1Iprimers5’-GAGTATCTAAAGAATGCCTATTG-3’
　　
　　CPS9Hprimers5’-GGCGGTCTAGCAGAATGCTCG-3’，
　　
　　利用CPS-J引物进行PCR鉴定，可以检测出2型和1型或2型；利用CPSlI引物进行PCR鉴定，可以检测出1型和14型；利用CPS9H引物进行尸CR鉴定，可以检测出9型。
　　
　　马清霞、何孔旺、陆承平等根据相关文献设计并合成引物，建立了能同时检测猪链球菌2型（cps）及其重要毒力因子溶菌酶释放蛋白（mrp）和细胞外因子（印f）的多重PCR方法。目的片段的大小分别885bp（mrp）、675bp（cps）和443bp（epf）。对参考菌株、人工攻毒病料和临床收集病料的检测结果显示，该多重PCR法特异性强、敏感性高，可直接从临床病料中检测出猪链球菌2型i并能鉴定其毒力因子表型。
　　
　　倪艳秀等（2002）根据猪链球菌2型的荚膜多糖抗原基因cps-j，合成1对可扩增长度为675bp目的片段的引物，对9株经玻片凝集试验检测为猪链球菌2型的菌株进行了检测，均呈阳性；同时，用此法对88份正常猪的扁桃体样品的细菌分离物进行了检测，36份呈阳性；同时用玻片凝集试验进行对照检测，36份也呈阳性。此法不需进行细菌的纯分离培养，即可用于猪链球菌2型的快速诊断以及流行病学调查，特异性强。
　　
　　何孔旺等用PCR方法检测2型猪链球菌两种毒力因子（MRP和EF），其检测的敏感度可达100个细菌。他们用建立的PCR对从病猪体内分离的菌株进行检测，检测的15株2型分离株中有13株MRP和EF，均呈阳性，为典型的高毒力表型菌株（MRP+EF+），其余1株为MRP+EF-，1株为MRP-EF-。
　　
　　（2）猪链球菌做随机扩增多态性DNA（RAPD）分型研究宁宏波等利用100条10聚核苷酸随机引物对分离的20株猪链球菌做随机扩增多态性DNA（RAPD）分型研究，有27条引物呈现良好的多态性和稳定性，产生稳定、复杂的指纹图谱。通过SPASS10.0软件分析了不同菌株之间的遗传距离，把20株猪链球菌分成4个聚类群。从分子水平上确立了该病的流行病学调查方法，同时为该病的防治提供了理论依据。
　　
　　（3）猪链球菌荧光PCR快速检测方法由北京检验*和中国兽医药品监察所共同研制成功的猪链球菌荧光PCR快速检测技术（2006），具有快速、敏感、特异、安全等显著优点，此检测技术将检测时间缩短为1．5h。此方法的问世，为我国开展猪链球菌检测提供了。该技术不仅可用于活猪检测，还可用于猪肉及其产品的检测。
　　
　　同时，于新和等利用自制荧光抗体进行链球菌病的诊断，可在2～3h内对链球菌作出诊断，比直接镜检具有更好的特异性和敏感性。