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离子交换层析填料在使用中需要注意的事项和其具备的特点

2022年06月22日 10:24来源:百林科医药科技(上海)有限公司 >>进入该公司展台人气:19


  离子交换层析填料广泛应用于蛋白质、核酸、多肽等生物大分子的高效分离纯化,该层析介质以高交联聚丙烯酸酯或聚苯乙烯/二乙烯基苯聚合物为基质,采用了的均粒聚合物微球制备技术和微球修饰技术,有高度粒径均一性和精确的孔结构,使其具备分辨率高、刚性强、耐酸碱、反压低、耐高温、使用寿命长及非特异性吸附低等特点。
  离子交换层析填料在实际的使用中还需要注意以下几个方面:
  1.上样前需将样品置换到平衡缓冲液中,在样品体积相对柱体积来说较大时,这一点尤其重要;
  2.柱子载量和要达到的分辨率决定上样量。如果想达到好的分辨率,建议上样量为柱子载量的30%;
  3.实际载量受样品大小和形状的影响,同时填料孔径,流速,样品浓度,pH/蛋白带电性、离子强度等均会影响载量;
  4.添加合适的去垢剂:添加离子型去垢剂时,应避免加入的去垢剂与填料配基结合而影响填料的结合载量。
  离子交换层析填料基质是由带有电荷的树脂或纤维素组成。带有正电荷的称之阴离子交换树脂;而带有负电荷的称之阳离子树脂。离子交换层析同样可以用于蛋白质的分离纯化。由于蛋白质也有等电点,当蛋白质处于不同的pH条件下,其带电状况也不同。阴离子交换基质结合带有负电荷的蛋白质,所以这类蛋白质被留在柱子上,然后通过提高洗脱液中的盐浓度等措施,将吸附在柱子上的蛋白质洗脱下来。结合较弱的蛋白质首先被洗脱下来。反之阳离子交换基质结合带有正电荷的蛋白质,结合的蛋白可以通过逐步增加洗脱液中的盐浓度或是提高洗脱液的pH值洗脱下来。
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