中成药中违禁添加药物的液质联用仪测定研究

摘要:[目的]建立中成药中违禁添加合成药物的筛选方法。[方法]采用有机溶剂提取相关的各类添加药物,用液质联用仪进行测定,并对一些一级质谱结果呈阳性的样品,进行了多级质谱结构性研究以确认化合物。[结果]依据各种药物的保留时间、分子离子质量、多级质谱结果等进行判断,建立了测定65种药物的筛选方法。[结论]　本方法建立了多种药物的质谱分析筛选分析系统,为监督和相关研究提供了技术保证。
    Analysis of some prohibited drugs in Chinese herb extracts by HPLC /MS　
     Abstract: [Objective] To establish a method to detect the prohibited drugs in Chinese herb extracts. 　[Methods] It included the extraction of drugs in organic solutions and their detection by HPLC /MS. For those positive samples their molecular structurs tested through HPLC /MS/MS.[Results]The scanning method for the identification of 65 drugs were established through their individual retention time, their specialmass and buy use of HPLC /MS/MS. [Conclusion] This paper introduces an analytical system to recognize and confirm p rohibited drugs in Chinese herb extracts bymass spectrum. It provides a necessary technological support for supervision and corresponding research.
    Key words: Prohibited drug; HPLC /MS; Chinese herb extract
    近年来不断有保健食品或植物提取药物中违禁添加合成药物的相关报道,其中包括各类兴奋剂、利尿剂、壮阳剂、厌食剂等几十种药物,为保护广大消费者的身体健康,有关国家都建立了相关的技术标准。在这一分析过程中,需要解决三个方面问题,一是药物的分析范围非常大,尤其是在极性、酸碱性上差异非常大,如何能达到一次分析完成全谱工作;二是药物含量限制差异巨大,有的每公斤仅允许几毫克;三是如何能准确地完成定性结论。我们依据国外相关实验标准,采用Waters Quattro LC系统结合Waters Symmetry C18色谱柱,非常好地建立了一个完整的相应违禁药物分析系统。
    1　仪器条件
    1. 1　色谱条件
    色谱条件:Waters 2690液相色谱系统/Waters 996PAD检测器,色谱柱为Waters Symmetry C18 （2.1mm×150mm） ,流动相分别采用0.1% HAc /H2O（A）,纯CH3CN（B）,采用梯度洗脱:0min, 3%B; 0～6min, 3%B; 6～52min,线性到95%B; 52～60min,95%B;60～61min,线性到3%B,运行时间为73min,流速为0.25mL /min,进样体积为20μL。
    2　质谱条件
    Micromass的Quatrro LC质谱仪（LC/MS/MS）, Source:ES（+）,Corona:3.50kvolts, Cone: 20volts, Extractor: 3volts, Source block temp:100℃,Desolvation temp:450℃, Collision:15evolts, Neb gas flow: 60L /h,Desol gas flow: 430L /h,Multiplier: 650volts。
    2　样品处理
    对固体样品取1.0g,加入1.0ml甲醇,于超声波中提取20min,超速离心10min,取上清液进行LC/MS的分析,对液体样品经离心、0.22μm的过滤膜过滤后直接进行LC /MS的分析。
    3　结果和讨论
    3. 1　色谱保留
    由于要分析化合物的化学性质差异较大,从极性到非极性、从酸性到碱性,要进行相关的液质分析,在色谱柱上的良好分离是这一分析的基础。我们采用Water Symmetry C18（ 2.1mm ×150mm）和酸抑制模式下的有机溶剂梯度洗脱方式进行分析,基本达到了所有目标色谱峰的完整基线分离,甚至保留时间仅有0.2min差异，也能达到基本的分离,这表明Symmetry柱有优良的分析能力。
    3. 2　色质联用对保留时间的识别
    在进行对照品色谱分离、建立光谱鉴定的同时,优先采用液相色谱/质谱联用仪的质量色谱图方式进一步识别和确认相应物质的各保留时间,并获取各组分对应峰位的质谱图,参照标准的保留时间（RT）与分子离子峰信息,作为定性判断样品中各组分的首要条件之一。
    3　药物组分的确认
    3. 1　LC/MS
    样品经过LC/MS的分析后,依据对照品的分子离子峰或者理论推导的分子离子峰值,提取其在样品中的质量色谱峰谱图,有对照品的化合物即可有标准的RT作为参比,进行阳性化合物的初步判断;对于无对照品的化合物,因为样品基质的干扰,同一质荷比下的色谱峰往往有若干个,这时则只有凭借相应的质谱信息以及结合化合物本身的一些特点进行判断,尤其是结合特征性的同位素峰、离子的出峰强度（一般质量色谱图的强度大于10的5次方）等因素加以综合考虑。
    3. 2　LC/MS/MS　
    经过LC/MS的初步分析后,对于初步判断为阳性的色谱峰,采用MS/MS的低能量碰撞方法（15evolts）进行对应的特定碎片离子扫描,获取“daughter”碎片质量谱图,并将其与对照品的碎片质量谱对照,或与理论结构推导进行比较进行zui终确认。如本分析中在保留时间为18.2min 出现的一个色谱峰的荷质比为279,但无对照品可以比对,通过其他手段怀疑是丁胺速尿,我们通过对该峰的特征碎片研究发现其裂解方式符合丁胺速尿而确认。
    我们采用Waters SymmetryC18、Waters 2690液相色谱系统和Quattro LC液质联用仪等设备,对几十种违禁药物建立了完整的相应的分析体系,具有快速、可靠的特点,能满足日常检验和法规检验的要求。