气相色谱一质谱法测定当归挥发油中藁本内酯的含量

摘要 目的：建立当归挥发油中藁本内酯的含量测定方法。方法： 气相色谱-质谱法，HP5973气相色谱-质谱联用仪，HP-5（30m×0.25 mm ×0.25μm） 毛细管柱，HP化学工作站，NIST谱库，HP7683 自动进样器。载气为高纯氦气，柱温采用程序升温，进样口温度250℃ ， 检测器温度280℃，选择离子采集（SIM），选取离子为148，161，190对藁本内酯进行监测。结果： 藁本内酯进样量在1.34ng ～1.34pg， 响应值与浓度呈良好的线性关系，灵敏度为0.1 ng/mL （S／N=lO）， 平均加样回收率为98.9％ ，RSD为2.2％ 。结论： 本文建立的GC-MS选择离子监测外标定量方法，具有灵敏、快速、准确的特点，可供当归挥发油的质量控制及藁本内酯的含量测定。
关键词:当归挥发油藁本内酯气相色谱-质谱法
   Determination of Ligustilide in Angelica sinensis Essential Oil by GC-MS
   ZHOU Chang—xin ，Zou Jian—kai ，Chen Yao-zu ZHAO Yu
Abstract: Objective：To develop a method for the determination of ligustilide in Angelica sinensis essential oil．
Methods：GC—MS method using American HP 5973 GC-MS apparatus，HP-5 （30m x 0.25mm x 0.25m）capillary column，HP chemical station，NIST MS library and HP7683 autosampler．The carrie gas is helium．Column temperature rises by programming．The injector temperature is 250℃and the detector temperature is 280 ℃ ． Ligustilide was determined by means of GC-MS with selected ion and qualifier ion monitoring． Results：The standard curve is linear for ligustilide within 1.34 ng～1.34 Pg and the sensitivity is 0.1 ng/mL （S／N =10）． The average recovery is 98.9％ and RSD is 2.2％ ． Conclusion：The results show this method is sensitive，rapid and accurate．
Key words:Angelica sinensis， essential oil， ligustilide， GC-MS
    藁本内酯是我国传统常用中药当归[Angelica sinensis（Oliv．） Diels] 挥发油中主要的有效成分，具有解痉、止咳平喘、调经止痛等多种生理活性， 是评价当归原药材质量的重要指标。但目前对有效成分藁本内酯的含量缺乏快速、灵敏的测定方法， 以往多采用气相色谱归一化法及液相色谱法 进行评估，显然无法适应新药开发的需要。为建立规范的含量测定方法，本文采用气相色谱-质谱法测定了藁本内酯的含量，为当归挥发油的质量控制提供了快速、灵敏、准确的测定方法。
1 仪器与试药
    美国HP5973气相色谱-质谱联用仪，HP7683自动进样器，HP化学工作站，NIST谱库。瑞士产Mettler Toledo AB204-E电子天平（精度0.1 mg）。
    试药：当归药材采自甘肃省岷县， 由浙江大学药学院张水利讲师鉴定。当归精油通过水蒸气蒸馏得到，藁本内酯对照品由本实验室制备，其结构通过测定UV、MS、H NMR、C NMR谱鉴定，经气相色谱检验纯度为99.3％ 。
2 方法与结果
2．1 色谱条件
    HP-5 （30m×0.25mm ×0.25m） 毛细管柱， 载气为高纯氦气，柱温程序：起始温度120 ℃，保持2 min后，以20℃/min 速率升温至240℃，保持12 min；进样口温度250℃，检测器温度280 ℃；进样方式：不分流进样，进样量为1.0μL，溶剂延迟6 min；质谱条件：离子源温度230℃， 四极杆温度150℃，EI源，电子能量70 eV，倍增电压1600V，选择离子采集（SIM），选取监测离子为148，161，190。
2．2 标准曲线的制备
     精密称取藁本内酯对照品13.4 mg．置10 mL容量瓶中，加二氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，再按常法分别稀释成1340，804,402，134．13.4，1.34 ng/mL 的对照品溶液。精密吸取各对照品溶液1.0μL进样，以对照品浓度（ng/mL ） 为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程：Y =86997X +896.61 r=0.9984
表明藁本内酯在1.34 ng ～1.34pg范围内具有良好的线性关系。
2．3 精密度考察
    精密吸取134ng/mL 的对照品溶液1.0 L在0，2，4，6，10h进样，结果其峰面积的RSD=0.77％ 。
2．4 样品含量测定     精密称取粉碎的全当归药材5.0012g．置于50mL的圆底烧瓶中进行挥发油提
取， 回流2h后将提取液以二氯甲烷萃取3次，减压除去溶剂后得14.6mg当归精油。将当归挥发油以二氯甲烷溶解并定容在10mL容量瓶中，摇匀，再按常法稀释，制成浓度为146 ng/mL 的供试品溶液。取供试品溶液连续重复进样5次，每次1.0μL．记录峰面积积分值，结果藁本内酯的平均含量为43.15％ ，RSD为2.1％ 。藁本内酯的分子离子峰为m／z 190，碎片基峰为m／z 161，本实验选取监测离子为148，161，190。
2．5 加样回收率试验
     分别精密称取当归药材5份，每份约5g，精密加入藁本内酯对照品各约15mg，按“2．4” 样品含量测定项下， 自“置于50mL的圆底烧瓶中进行挥发油提取” 操作，提取当归挥发油并配成供试品溶液，吸取1μL注入气相色谱仪中，记录峰面积值，结果平均加样回收率为98.9％ ．RSD为2.2％ 。
3 讨论
    藁本内酯的含量测定以往多以气相色谱归一化法 进行评估， 结果不够准确；虽然也曾用液相色谱法 来测定，但由于藁本内酯极性较小，保留时间较长，不适合现代制剂快速检测的需要。气相色谱是一种较液相色谱更灵敏、对挥发油检测更迅速的分析手段，本文以当归挥发油中的主要活性成分藁本内酯为定量指标，建立了灵敏度高， 特异性好的气相色谱一质谱选择离子（SIM）外标方法，为当归挥发油的质量控制提供了研究方法。不仅如此， 由于其高度的灵敏性，该方法已经在药代动力学中应用 。因此，本文建立的气相色谱一质谱选择离子（SIM）外标方法对于含有藁本内酯的药材 及复方制剂 的检测都具有一定的价值。
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