测定葛根及其制剂脑得生片中葛根素的含量

摘要:目的：测定葛根（野葛、粉葛）及其制剂脑得生片中葛根素的含量。方法：采用毛细管电泳法,双氯灭痛为内标物。测定条件为:运行缓冲液:30mmol/L硼砂缓冲溶液（pH 9.37）;操作电压30 kV ,紫外检测波长254nm。结果：葛根素的线性范围为10～100μg/ml,葛根的平均回收率为96.77%（ RSD2.65% ,n=3） ;脑得生片平均回收率为:100.64%（ RSD 0.28% ,n= 3） 。结论：该方法简便、快捷,具有良好的精密度、回收率和线性关系,结果满意。
关键词:毛细管电泳;葛根素;脑得生片
脑得生片是中国药典2000年版一部收载成药,处方中含葛根,具有活血化淤、疏通经络、醒脑开窍之功效,用于脑动脉硬化、缺血性脑中风及脑出血后遗症等。脑得生片原标准中无葛根素的含量测定。毛细管电泳法（HPCE 法）具有分析周期短、消耗溶剂少、费用低、抗污染能力强的优点,适宜于葛根及其制剂中葛根素的快速定量分析。本实验
以双氯灭痛为内标测定了葛根及其制剂脑得生片中
葛根素的含量。
1 　仪器和试剂
Beckman P/A system 5000型毛细管电泳仪（美国Beckman 公司）;融熔石英毛细管柱75μm×77cm。硼砂（分析纯）,甲醇（色谱纯）。葛根素、双氯灭痛对照品（中国药品生物制品检定所）。
2 　操作条件
运行缓冲液:30mmol/L硼砂溶液;操作电压30kV,极性由正到负,紫外检测波长254nm,柱温25℃;采用压力进样,进样时间5s。
毛细管冲洗方法:开机后用0.1mol/L氢氧化钠溶液冲洗2min ,运行缓冲液2min。每次测定之间运行缓冲液冲洗1 min。
3 　测试溶液的制备
3. 1 　对照品贮备溶液的制备
精密称定葛根素对照品12.5mg,用甲醇定容成浓度为0.5mg/ml的对照品溶液。
3. 2 　内标溶液的制备
精密称定双氯灭痛一定量,加甲醇配成180μg/ml的溶液,备用。
3. 3 　样品溶液的制备
3. 3. 1 　取葛根生药粉0.1g,精密称定,精密加入内标溶液50ml,称定重量,超声处理1h,放冷,加甲醇补足重量,静置,取上清液作为样品溶液。
3. 3. 2 　取脑得生10片,除去包衣,研细混匀,精密称定0.2g,精密加入内标溶液25ml,称定重量,超声处理1h,放冷,加甲醇补足重量,静置,取上清液作为样品溶液。
3. 4 　阴性溶液的制备
按处方比例和脑得生片制备工艺制成不含葛根的脑得生片,照样品溶液制备方法制备阴性溶液。
4 　结　果
4. 1 　电泳行为
在本实验操作条件下,葛根素,双氯灭痛分离良好,阴性溶液与对照品溶液峰及内标溶液峰没有重叠。
4. 2 　线性范围
精密吸取葛根素对照品贮备溶液0.2 ,0.4 ,0.8 ,1.2 ,1.6 ,2.0ml 置于10ml量瓶中,加入内标溶液5.0ml,再加甲醇至刻度,摇匀。以对照品质量浓度x（μg/ml） 为横坐标,以对照品的校正峰面积（峰面积/ 迁移时间,A/t） 与内标的校正峰面积（Ais/ Tis） 之比Y为纵坐标,计算回归方程。葛根素的质量浓度在10～100μg/ml范围内与校正峰面积成线性关系,相关系数r=0.9998 ,表明方法的线性关系良好。回归方程:Y = 0.006211+ 0.01938X ,r =0. 9998。
4. 3 　精密度
取低、中、高三个质量浓度的葛根素对照品溶液连续进样3次,校正峰面积的日内精密度RSD 在1.59 %以内,日间精密度RSD在1.83%以内。
4. 4 　回收率试验
向已知含量的葛根及在成药的阴性溶液中,精密加入不同量的葛根素溶液,如法测定,计算回收率。
4. 5 　样品测定
取不同批次脑得生片以及野葛和粉葛,依法测定。
5 　讨　论
野葛中葛根素含量（18.79～25.46mg/g） 明显高于粉葛（0.824～14.32mg/g）,而且野葛的质量相对稳定,粉葛的品质不一,葛根素含量变化很大。由试验结果分析,脑得生片中加的是野葛。
参考文献
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