分光光度法测定芥穗炭中总黄酮的含量

关键词：荆芥穗炭；总黄酮；分光光度法；含量测定
1 仪器与材料
1．1 仪器
TM902C数字式温度计（深圳市海地实业有限公司）；PT-02热电偶（南京市热工仪表厂）；FA-1004电子分析天平（上海天平仪器厂）；UV-2401紫外可见分光光度计（日本岛津）。
1．2 材料
荆芥穗药材购买自河北、山东、江苏，经本校中药鉴定教研室吴启南教授鉴定为唇形科植物荆芥的花穗。洗净，切小段备用。自制芥穗炭系将荆芥穗段，参照药典方法炒炭，控制温度220℃，时间8min，炒至外表焦褐色，内部焦黄色。芦丁对照品购自中国药品生物制品检定所，批号：0080—9705。其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2．1 对照品储备液的制备
取120℃减压干燥至恒重的芦丁埘照品20mg，精密称定，置100mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每1mL中含芦丁0.2064mg）。
2．2 供试品溶液的制备
取样品粉末（过20目筛）约2.5g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚适量，加热回流至提取液无色，放冷，弃去石油醚液?再加甲醇适量，加热回流至提取液无色，浓缩，移置25m1量瓶中，用少量甲醇洗涤容器，洗涤液并人量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2．3 吸收波长的确定
取对照品2mL和4号样品0.5mL分别置2个25mL量瓶中，分别加水至10mL，加5％亚硝酸钠溶液1mL，使混匀，放置6 min（ 断振摇），加10％硝酸铝溶液1mL，使混匀，放置6min（不断振摇），加1moL／L*试液10mL．再加水至刻度，摇匀，放置15min，在分光光度计上于200～800nn处扫描，由扫描结果确定测定检测波长为500nm。
2．4 标准曲线的绘制
精密吸取对照品储备液0，2.0，4.0，6.0，8.0与10.0mL，分别置于25mL量瓶中，按照“吸收波长的确定”项下的方法，自“加水至10m1”起依法制得各对照品溶液。以第1份溶液为空白。在分光光度计L选择500nm波长处测定吸收度：以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线：得标准曲线为：A=1.736+81.93 ，r=0.9994，
线性范围为0.016512～0.082560mg／mL。
2．5 精密度考察
取3号对照品溶液，按照“标准曲线的绘制”项下的方法，依法连续测定6次．RSD为0％，表明本方法精密度良好。
2．6 稳定性考察
取4号样品溶液0.5mL，置25mL量瓶中，按照“标准曲线的绘制”项下的方法，自“加水至10Ml”起，依法每隔10min进行测定，结果表明在30min内样品溶液的稳定性，RSD：2.32％<3％时间延长，样品吸收度下降较多：故选择测定时间为10～30min。
2．7 重复性试验
取4号样品粉末，按照“供试品溶液的制备”项下的方法依法制得供试品溶液6份，分别从中精密吸取0.5mL于25 mL量瓶中，按照“标准曲线的绘制”项下的方法，自“加水至l0mL”起依法测定，重复性结果表明样品中总黄酮平均含量为25.58mg／g．RSD=1.39％。
2．8 回收率考察
取2号样品6份，每份1.25精密称定，每2份1组，共3组。分别加入芦丁对照品25，31，38mg，按照“供试品溶液的制备”项下的方法依法制得供试品溶液6份，从中分别精密吸取0.5m1于25mL量瓶中，按照“标准曲线的绘制”项下自“加水10mL”起，依法测定。计算得平均同收率为97.24％，RSD=1.81％。
2．9 样品含量测定
精密吸取制备好的6份样品的供试品溶液各0.5mL于25mL量瓶中，按照“标准曲线的绘制”项下的方法，自“加水至10mL”起依法测定，计算样品中总黄酮的含量。
3 讨论
芥穗炭中总黄酮的提取方式有：冷浸、超声提取、索氏提取等，通过实验比较得出索氏提取法提取zui*。
本实验对荆芥穗炒炭前后的总黄酮的含量进行了比较，发现炒炭后总黄酮的含量明显升高。对比荆芥穗炒炭前后的紫外光图谱，结果表明荆芥炒炭前后紫外光谱图有较大差异．提示荆芥穗炒炭前后黄酮成分及比例有较显著的改变，这可能与荆芥穗炒炭后止血作用增强有关，但具体成分变化及相应比例有待进一步研究。