西地那非原料及其中成药制剂的红外光谱鉴别

摘要：目的：检查非法生产的枸橼酸西地那非原料和非法加入补肾壮阳中成药及性保健药品中的枸橼酸西地那非。方法：建立化学分离方法，从液相色谱法初步确认含有枸橼酸西地那非的原料药、中成药及性保健品中分离提取西地那非，并用中红外分光光度法（溴化钾压片）进行定性鉴别。结果对液相色谱法检测含有西地那非的28批原料、62批各种剂型的中成药，进行红外鉴定，均检出含有西地那非。结论：该方法专属性强，快速，简便。
关键词：原料药；中成药；西地那非；红外光谱；化学成分
枸橼酸西地那非（Sidenafile Citrate）是辉瑞制药有限公司发明和生产的，是世界上*个经FDA认证的治疗勃起功能障碍（ED）的口服药物。2000年起，万艾可（西地那非）的销售额超过8亿美元，占治疗勃起功能障碍（ED）药物的90%。巨大的销售额和利润促使不法分子仿冒、制假，或在一些中成药中违法加入西地那非。有文献报道用薄层色谱（TLC）、液相色谱（HPLC）和液相色谱一质谱联用技术（LC-MS）鉴别和定量中成药中的西地那非。当缺乏LC-MS技术时，仅从TLC和HPLC的保留时间一致，还不能充分肯定样品中含西地那非，而中红外分光光度计及红外光谱的专属性使得此技术成为药品鉴别的有力工具。本文报道了从各种性保健药和中成药中提取、分离西地那非的方法，并结合红外光谱进行鉴别。
1 材料与方法
1．1 化学试剂和仪器
样品来源：国家药品监督管理局、上海市药品监督管理局、上海市*局等执法机关查收的各种性保健品、食品、仿冒辉瑞制药有限公司的“万艾可（Viagra）”及原料药，其中原料28批，各种非法产品约62件。枸橼酸西地那非对照品：辉瑞制药有限公司提供，批号：98068-QCS-7，含量99.8%。其他试剂均为分析纯。
仪器：Nicolet AVATAR 360 FT IR中红外测定仪，扫描次数16，分辨率4，测定范围4000～400/cm。
1．2 提取分离西地那非的方法
所有样品首先采用HPLC方法ll 分离鉴别，当样品中出现保留时间与枸橼酸西地那非的主峰保留时间一致的色谱峰时，以样品为原料，根据红外分光光度法，溴化钾压片，得到的红外图谱与枸橼酸西地那非对照品或西地那非对照品的图谱比较进行鉴别。如果红外光谱图有差异，可能是其他酸根引起，则照（1）的方法将其他酸根的西地那非盐转化为西地那非的形式，再与西地那非的红外光谱图比较，进行红外鉴别；检验28批原料样品，它们的红外图谱与对照品图谱的匹配率均在94.9%～98.7%。当样品为制剂时，根据液相色谱图的情况，采用以下分离提取方法，获得西地那非。
（1）当HPLC检测到一个西地那非色谱峰或西地那非色谱峰占总峰面积的50%以上时，取样品粉末适量，加水3mL，振摇使分散，加氨试液（约5mL）成碱性，加氯仿20mL，振摇5min，滤过，用氯仿5mL洗涤固体，滤液静置分层。分离氯仿层，置水浴上蒸干，乙醚洗涤残渣，残渣照红外分光光度法，溴化钾压片，获得的图谱与枸橼酸西地那非对照品同法制得的红外光谱图比较，检验66批制剂样品，它们的红外光谱图与西地那非对照品图谱的匹配率均在92.9％～96.7 。
（2）当样品中含有大量中药，HPLC检测到的西地那非色谱峰占总峰面积的50％以下时，用上述方法不能分离提取获得纯度较高的西地那非时，取样品粉末适量，置离心试管中，加甲醇2mL，超声使溶解，离心．取上清液作为供试品溶液；另取枸橼酸西地那非对照品10mg，加甲醇1mL溶解，作为对照品溶液。根据薄层色谱法，吸取上述两种溶液各300～400μL，分别于20cm×20cm GF254薄层板上线条形点样，以正己烷-乙醇氨水溶液（30：70：1）为展开剂展开并于UV 254nm灯检，同时挖取与枸橼酸西地那非对照品Rf值一致的样品斑点和枸橼酸西地那非对照品的斑点，分别置试管中，加入甲醇2mL，超声5min，离心．取上清液置水浴上蒸干，残渣用少量乙醚洗涤，根据红外分光光度法，溴化钾压片，获得的图谱与枸橼酸西地那非对照品同法制得的红外光谱图比较，检验6批样品，它们与对照品图谱的匹配率为89.2％～94.8％。
2 讨论
在样品和对照品的红外光谱图中，可以找到反映西地那非结构特征的吸收峰：酰胺基（-CONH-）3100.1/cm，1 689.0/cm（酰胺I带）。1531.5/cm（酰胺Ⅱ带），1290.1/cm （酰胺Ⅲ带）。749.3/cm；磺酰胺基（RSO2N- ）1172.5 /cm。砜基（SO2）1330.7/cm。不饱和醚键（一（C-O-C）1248.5//cm。1067.7/cm ；苯环骨架（C==C ）和碳氮键（C==N ）。1 581.1/cm 、1599.9/cm；1489.8/cm 、1464.8/cm；苯环碳氢键（一C--H ）：789.8 /cm、688.8/cm、3100/cm；氮甲基（N--CH3）1390.9/cm； 甲基和亚甲基（C--H）2973.9～2795.9/cm、1455.6 /cm，1370.5/cm等．从而证实原料样品、制剂样品中含西地那非
在样品和对照品的红外光谱图中，由于枸橼酸的加入，使反映西地那非的一些精细吸收峰改变，但通过样品红外图谱和对照图谱的比较，能够证实原料样品为枸橼酸西地那非，而不是西地那非，为HPLC的含量测定提供了计算的依据。然后，将此类样品照（1）的方法将其枸橼酸西地那非盐转化为西地那非的形式。可获得与图一致的红外光谱，西地那非的结构特征峰*显现。
在样品和对照品的红外光谱图中．由于溶剂和硅胶的原因，使它们与图有差异，但同样条件下分离取得样品红外图谱和对照图谱一致。且反映酰胺基（--CONH一）3311.2/cm、1689.7/cm （酰胺I带）．1531.0/cm（酰胺Ⅱ带）。1290.0/cm （酰胺Ⅲ 带）．745.3/cm：砜基（SO2）1330.9/cm； 不饱和醚键（C一（C-O-C）1247.4/cm 、1 066.4/cm ；苯环骨架（C=C）和碳氮键（C--N）1581.1/cm、1600.6/cm；1489.2/cm、1465.0/cm；苯环碳氢键（==C一H ）：790.8 /cm 、689.0/cm、3100/cm；甲基和亚甲基（C--H ）29ll.7～2795.4/cm、1457.2/cm等。从而证实制剂样品中含西地那非。
用（2）方法分离的TLC斑点也可用氯仿替代甲醇作溶剂，同法处理的残渣获得的样品红外光潜图与对照品的红外光谱图一致，且以图1的对照图谱的匹配率为89.0%以上。
参考文献
[1] 张启明，尹华，黄海伟，等．检查中药中非法加入拘橼酸西地那非的方法研究[J]．药物分析杂志．2002．22（4）．315
[2] 国家药品监督管理局标准（试行）WJ-104（X-305）-99．1999