人参中人参皂苷HPLC定量方法的测量不确定度的评定

摘要：目的探讨人参中人参皂苷Rg1、Re和Rb1的HPLC定量分析方法的测量不确定度的评定方法。方法：通过分析测量过程，确定并简化不确定度来源；利用HPLC法测定人参中人参皂苷Rg1、Re和Rb1的方法验证数据及经验数据，通过统计学方法，量化不确定度分量；计算合成不确定度和扩展不确定度。结果用HPLC法测定人参中人参皂苷Rg1、Re和Rb1的扩展不确定度分别为0.12e，0.14e和0.13e。结论测量不确定度可用于人参中人参皂苷的标准*的制定；测量不确定度的评定方法的确立对于中药质量标准的研究具有重要意义。
    关键词：测量不确定度；人参皂苷；液相色谱法；人参
    测量不确定度（measurement uncertainty）是“与测量结果相关联的参数，表征合理地赋予被测量量值的分散性”，它是被测量客观值在某一量值范围内的一个评定，其大小决定了测量结果的实用价值。不确定度越小，测量结果的质量越高，使用价值越大。测量不确定度与误差是两个不同的概念，误差在实际应用中难以确切求得，因此测量不确定度的提出引发了经典误差理论及测量结果评定与表示的重大变革，是现代误差理论形成的基础。1993年出版的《测量不确定度表示指南》（GUM）中明确规定了测量不确定度的定义、评定方法及表达方式，从而使不同学科、不同地域在表示测量结果及不确定度时具有一致的含义。
    《测量不确定度表示指南》颁布以来，已被许多性、区域性组织和国家采用。在分析化学领域，1995年由欧洲化学委员会（EURACHEM）起草了《分析测量中不确定度的评定》 ，指引如何将《测量不确定度表示指南》中的定义应用于分析测定。目前，测量不确定度的概念在国家计量基准、标准物质的研究和对比中应用广泛，同时逐渐向其他领域渗透。因此，正确表达和评定测量方法的测量不确定度将逐步成为通行的要求。
    本文将测量不确定度的概念引入中药质量评价及标准制定中，以人参药材中人参皂苷Rg1，Re和Rb1的HPLC定量方法的测量不确定度的评定为例，探讨以方法学验证数据评定测量不确定度的过程，评定结果可用于人参的质量标准的制定。
    材料与方法
    仪器与试剂 美国Agilent HP1100型液相色谱仪，二极管阵列检测器。人参皂苷Rg1，Re和Rb1均购自中国药品与生物制品检定所，含量不低于98％。HPLC级乙腈为美国Merck公司产品，甲醇为分析纯（LAB SCAN，爱尔兰），水为Milli Q超纯水。人参药材由香港政府卫生署提供。
    分析条件Beckman Ultrasphere ODS柱（250mm×4.6 mm ID，5μm）；流速1.6mL/min；柱温25℃；检测波长203 nm。流动相由乙腈和水组成，梯度洗脱程序为：0—20 min，乙腈的体积百分比为20％；20—60 min，乙腈的体积百分比由20％增至42％
    结果与讨论
    1 精密度研究
    分析10批人参药材，每批药材测定两次，人参皂苷Rg1，Re和Rb1的测量结果及相对标准不确定度。
    2 误差研究
    在用HPLC法测定人参中人参皂苷Rg1，Re和Rb1的方法学验证中测定了5次加样回收率，测量结果及不确定度分析。
    3 对照品纯度
    对照品人参皂苷Rg1，Re和Rb1的标示含量不低于98％
    4 样品均匀性
    人参皂苷在人参药材的各部位均有分布，不挥发，且化学性质较稳定，根据文献，样品均匀性引起的相对标准不确定度取估计值0.05。
    5 合成标准不确定度和扩展标准不确定度
    6 影响人参中人参皂苷Rgl，Re和Rbl的含量测量方法的测量不确定度的因素分析
    各不确定度分量对合成相对标准不确定度的贡献。可见，样品的不均匀性对人参药材中人参皂苷Rgl，Re和Rbl的HPLC定量方法的测量不确定度影响zui大，而对照品纯度的影响zui小。因此样品不均匀性这一参数在分析测定时应加以严格控制，例如采用合理的取样方式、增加取样量、控制粉碎粒度等。
    7 测量不确定度的应用
    目前测量不确定度的重要性已经得到广泛的认识，一个完整的定量分析结果应该包含不确定度信息，它是定量分析结果的重要组成部分，可用于评估定量方法的可靠性和测量结果的可信程度。此外，测量方法的不确定度在方法学研究等方面也能提供有益的指导，如提供分析过程的主要误差来源信息以及解决方案等。
    测量不确定度的另一个用途是用于标准的制定。HPLC法测定人参中人参皂苷Rgl，Re和Rbl的含量是香港中药标准中人参药材下的检测项，该标准的检测*是根据l0批代表性药材中人参皂苷的测量平均值及相对标准偏差，以及测量方法的不确定度计算得到。标准制定时考虑测量结果的不确定度，制定的标准*将更加合理。因此，进行测量不确定度的评定方法研究对于中药标准的制定具有重要意义。
References：
l 1 f International Bureau of Weights and Measures．IS0． Guide to the Expression of Uncertainty in Measurement，International Organization for the Standardization[Z]．Geneve：ISO，1995．2—3．