小鼠ELISA试剂盒操作步骤及实验提醒

　　小鼠ELISA试剂盒操作步骤：

　　1. 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;。

　　2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　3. 加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。

　　4. 温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。

　　5. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。

　　6. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

　　7. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

　　8. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

　　9. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

　　实验提醒：

　　1、混合蛋白溶液时，避免起泡。

　　2、加校准品与样本时，每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头，公共组分应该悬臂加样，避免交叉污染。

　　3、合适的温育时间，和充分的洗涤步骤，是保证实验结果准确性的必要条件。

　　4、底物溶液为无色液体，保存过程中变为蓝色，代表底物溶液已经失效，不得使用。

　　5、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致，加入终止液后，蓝色底物产物，会瞬间变为黄色。

　　6、实验中，用剩的板条，应立即放回自封袋中，密封(低温干燥)保存。

　　7、所有液体组分，使用前充分摇匀，严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。

　　8、检测必须符合实验室管理规范的规定，严格防止交叉污染，所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置。

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