ELISA实验各种检测方法的优缺点

     ELISA的基本原理是将抗原（或抗体）结合到固相载体上，并将抗原（或抗体）与某种酶连接成酶标记抗原（或抗体），在检测时，将待检样本和酶标抗原（或抗体）按一定程序与固相载体上的抗原（或抗体）反应，然后用洗涤的方法去除未反应的部分，加入底物后，底物被结合在固相载体上的酶催化产生有色物质，通过酶标物显色的深浅间接反映被检抗原或者抗体的存在与否或者量的多少。

下面分述ELISA实验各种检测方法的优缺点：

　　1、直接法（direct ELISA）

　　将抗原直接固定在固相载体上，参加酶符号的一级抗体，即可测定抗原总量，此一级抗体的特异性非常重要。

　　优势：操作手续简略，因无须运用二抗可防止交互反响。

　　缺陷：实验中的一抗都得用酶符号，但不是每种抗体都适合做符号，费用相对进步。

　　2.间接法（indirect ELISA）

　　此测定办法与直接法相似，不一样在于一级抗体没有酶符号，改用酶符号的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。

　　优势：二抗能够加强信号，并且有多种挑选能做不一样的测定剖析。不加酶符号的一级抗体则能保存它最多的免疫反响性。

　　缺陷：交互反响发作的机率较高。

　　3.双抗体夹心法（sandwich ELISA）

　　被检测的抗原包被在两个抗体之间，其间一个抗体将抗原固定于固相载体上，即捕捉抗体。另一个则是检测抗体，此抗体可用酶符号后直接测定抗原的量；或不符号，再透过酶符号的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体有必要当心选择，才可防止交互反响或竞争一样的抗原联系部位。

　　优势：高活络、高专一性，抗原无须事前纯化。

　　缺陷：抗原必定得具有两个以上的抗体联系部位。

　　4.竞争法（competitive ELISA）

　　样本里的抗原（自在抗原）和纯化并固定在固相载体上的抗原（固定抗原）一同竞争一样的抗体，当样品里的自在抗原越多，就能够联系越多的抗体，而固定抗原就只能联系到较少的抗体，反之亦然。经清洁过程，洗去自在抗原和抗体的复合物，只留下固定抗原和抗体的复合物，拿来与只要固定抗原的对照组成果相比拟，依据呈色区别就可计算出样品里的抗原含量。

　　优势：可适用比拟不纯的样本，并且数据再现性很高。

　　缺陷：全体的敏感性和专一性都较差。