Acti-stain555phalloidin，使用说明

一、简要介绍

鬼笔环肽（Phalloidin），又称鬼笔鹅膏素，是从毒蘑菇鬼笔鹅膏（Amanita phalloides）中分离到的一种七氨基酸多肽毒素，以较高的亲和力和特异性结合肌动蛋白丝F-actin（聚合形式的肌动蛋白）（Kd=20nM）。

鬼笔环肽将肌动蛋白聚合的临界浓度降至≤1μg/ml，从而用作一种聚合增强剂。

荧光探针标记的鬼笔环肽（Fluorescent-conjugated Phalloidins）能对组织培养细胞、组织切片和无细胞制备物进行肌动纤维丝染色。

经鬼笔环肽标记的肌动纤维丝仍能维持标记前的许多功能特征包括能够与肌球蛋白相互作用。

二、规格信息

【外观】：红色固体

【纯度】：>95%

【分子量】：1775

【保存】：冻干粉4℃干燥保存半年；储存液-20℃避光保存半年；

【重溶方法】：使用前简单离心使得产品都降至管底，加入500µl 甲醇充分溶解后配置成14µM储存液。建议按照10×50µl分装，-20℃避光保存，稳定保存6个月。

【生产厂商】：西安强化生物科技

三、使用说明

1. 免疫荧光（Immunofluorescence）

需要材料：

1）Actin-stainTM 555 Phalloidin（PHDH1）；

2）盖玻片爬片生长达到半汇合的Swiss 3T3细胞；

3）PBS buffer；

4）固定剂；

5）破膜剂；

6）抗荧光淬灭封片剂；

7）100nM DAPI in PBS；

8）载玻片；

9）盖玻片封固液（透明指甲油）；

2. 制备稳定的荧光标记肌动蛋白丝（Preparation of stabilized fluorescent actin filaments）

体外肌动蛋白运动试验（in vitro motility assays），稳定的荧光标记肌动蛋白丝是研究肌球马达蛋白的底物材料。Actin-stainTM 555 Phalloidin结合对肌球蛋白ATPase的肌动蛋白激活无影响。

需要材料：

1）肌动蛋白Actin protein；

2）通用肌动蛋白缓冲液General Actin buffer；

3）10×聚合缓冲液Polymerization buffer；

4）Actin-stainTM 555 Phalloidin；

操作流程：

1) 用250ul 添加0.2mMATP和1.0mM DTT的通用肌动蛋白缓冲液来重悬兔肌肉肌动蛋白（rabbit muscle actin），使其浓度为1mg/ml。

2) 加入1/10体积的聚合缓冲液来聚合肌动蛋白，室温孵育1h。

3) 用含70nM Actin-stainTM 555 phalloidin的聚合缓冲液按照1:100的比例稀释聚合的肌动蛋白丝。

4) 吸取1ul标记好的肌动蛋白滴在已滴有一滴抗荧光淬灭剂的载玻片上。

5) 取一干净盖玻片盖在液滴处，用纸巾吸掉多余液体。

6) 荧光显微镜观察荧光纤维。肌动蛋白丝平均长度为2-10um，在4℃避光能稳定保存1周。

四、更多试剂

HumanLDL

HumanHDL

HumanOx-LDL

HumanAc-LDL

BODIPY 665/676

BODIPY 558/568 C12

Nigericin,Sodium Salt

Fluo-5N AM,Cell Permeant

Human High Density Lipoprotein

Human Dil-High Density Lipoprotein

CAY10731 (H2S Probe)硫化氢荧光探针

DL-Propargylglycine DL-炔丙基甘氨酸

Human Acetylated High Density Lipoprotein

Human VLDL (Human Very Low Density Lipoprotein)

原包装应尽量选择避光，阴暗，干燥的地方进行存放，同时此试剂仅用于科研实验。

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