以下是大鼠胃蛋白酶(PP)ELISA试剂盒的规范操作流程及关键注意事项

　　以下是‌大鼠胃蛋白酶(PP)ELISA试剂盒‌的规范操作流程及关键注意事项：

　　BS-3164 大鼠胃蛋白酶(Pepsin)ELISA试剂盒

　　一、试剂准备与样本处理‌

　　试剂平衡‌：使用前将所有试剂室温平衡20分钟，避免剧烈震荡产生泡沫影响加样精度。

　　标准品配制‌：冻干标准品需用样品稀释液复溶(如100ng/mL起始浓度)，静置10分钟后混匀，再梯度稀释为50ng/mL、25ng/mL等系列浓度。

　　样本处理‌：

　　血清/血浆‌：采集后需3000×g离心20分钟(血清)或15分钟(血浆)分离上清，避免溶血或反复冻融。

　　组织匀浆‌：用预冷PBS按1:9(重量:体积)匀浆，5000×g离心10分钟取上清。

　　二、操作步骤‌

　　加样‌：

　　空白孔不加样，标准孔加50μL梯度标准品，样本孔加50μL(1:1稀释后样本)。

　　建议标准品和样本做复孔以减少误差。

　　孵育与洗涤‌：

　　加入50μL生物素标记抗体，37℃孵育60分钟，甩干液体后用洗涤液(含0.05%吐温-20)洗板5次(手工洗板需拍干)。

　　洗板机洗涤时可增加1次洗涤次数。

　　显色与终止‌：

　　每孔加入底物A/B各50μL，37℃避光显色15分钟，立即加入50μL终止液。

　　三、结果判读‌

　　使用酶标仪在450nm波长下读取OD值，15分钟内完成检测。

　　以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制曲线，计算样本浓度。

　　四、注意事项‌

　　加样精度‌：使用校准后的加样器，避免交叉污染(一孔一吸头)。

　　温育控制‌：

　　推荐水浴温育以减少“边缘效应”。

　　显色阶段严格避光(TMB底物需避金属器械接触)。

　　保存条件‌：未用板条需密封防潮，2-8℃保存;试剂开封后避免反复冻融。

　　五、性能参数‌

　　灵敏度‌：通常≤1.56ng/mL。

　　重复性‌：板内/板间变异系数<15%。

　　如需具体品牌差异说明或问题排查，可进一步补充需求。

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