用于 ELISA 检测的样品处理
在医学检测中,如何正确处理样品直接影响检测结果的准确性,尤其是 ELISA 检测中不同样品的处理方式各异,如何选择?
在医学研究中,酶联免疫吸附试验被广泛用于检测各种生物标志物。然而,不同的样品类型需要不同的处理方法,以确保检测结果的准确性。例如,采集的血液样本需在室温或低温下静置,随后通过离心分离成血清或血浆。其中,血清是从血液中分离出来的无细胞成分,而血浆则含有纤维蛋白原和其他凝血因子。选择正确的抗凝剂也很关键。此外,对于组织匀浆和细胞裂解物,需注意添加蛋白酶抑制剂以防止目标分析物降解。正确处理细胞培养上清液,则需要通过离心去除杂质。每一步操作都至关重要,直接关系到最终的检测结果。因此,研究人员和医疗工作者在进行 ELISA 实验前,天正信达详细介绍并严格遵循相应的样品处理指南,以确保实验的成功和数据的可靠性。
以下是用于ELISA检测的样品处理规范及注意事项:
一、样本类型及预处理方法
血清样本:
采集后室温静置30分钟至2小时(或4℃过夜)使血液凝固
离心条件:2000-3000×g离心15-20分钟
关键点:避免溶血,倾斜试管扩大血清分离面
血浆样本:
需使用EDTA/肝素抗凝管采集
采集后30分钟内离心(700-1000×g,10-15分钟)
注意:不可吸取中间白细胞层
细胞培养上清:
直接离心(1000×g,20分钟)去除细胞碎片
分泌性成分检测需确保无菌收集
组织样本:
需用预冷PBS冲洗残留血液(1:9重量体积比匀浆)
推荐加入蛋白酶抑制剂,超声或冻融辅助裂解
二、保存条件规范
样本类型 短期保存 长期保存 有效期
血清/血浆 4℃(1周内) -80℃分装 1-6个月
细胞上清 4℃(24小时) -80℃分装 1个月
组织匀浆 4℃(立即检测) -80℃分装 3个月
三、关键注意事项
干扰物控制:
严禁使用含NaN3的防腐剂(会抑制HRP活性)
脂血/溶血样本需额外离心处理
冻融要求:
分装保存避免反复冻融(≤3次)
复溶时需室温平衡后轻柔混匀
浓度调整:
预实验确定稀释倍数(建议2-500倍梯度)
OD值超标准曲线时应稀释重测
四、特殊样本处理
尿液/胸腹水:需10000×g高速离心去除颗粒物
红细胞裂解物:用4倍体积超纯水裂解后离心
食品样本:需均质化处理并去除脂肪层
注:以上资料仅供参考,具体请咨询技术老师或供应商。
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