高压蒸气灭菌方法的原理是水在大气中100℃左右沸腾，水蒸气压力增加，沸腾时温度将随之增加，因此，在密闭的高压蒸气灭菌器内，当压力表指示蒸气压力增加到15磅（1.05 kg/cm）时，温度则相当于121.3℃，在这种温度下20min即可*杀死细菌的繁殖体及芽胞。在灭菌时，加足一次灭菌之用水于夹层中。用螺旋固定锅顶铁盖底部，使不漏气。加热，水沸后蒸气沿夹层上升。由洞入内筒，当蒸气初进入内筒时应把上下排气管打开，放出冷空气后，关闭排气管。由于蒸气通入密闭之空间，压力即上升，从压力表可以看出，蒸气还通过安全阀门，以保证压力维持于一定限度，使压力维持于15磅20 min，然后关闭热源，使压力逐渐降低至零，方可打开锅盖，否则因压力骤降，玻璃器内之液体会冲出瓶口，发生外溢或爆炸等危险。
 
1.  接好电源。
2.  检查高压蒸汽灭菌锅右下方冷却瓶水位，保证水位在zui高和zui低水位线之间。
注意：不要弯曲蒸汽排泄管和堵塞通气孔，否则在灭菌后不易打开高压锅门。
3.  锅中加入蒸馏水，水平面要超过灭菌锅底部不锈钢板。
4.  打开左上方电源开关。显示zui初设定值为120℃/20分钟。
5.  物品灭菌：把需灭菌物品放入不锈钢篮。
注意：不可把物品直接放入锅中，否则将会使排气口和安全阀堵塞造成高压锅失控，将导致危险。
6.  关锁高压锅盖。双手握住高压锅盖把手顺时针旋紧大约2圈，感觉有机械阻力时再旋转1/4圈确保关紧。
7.  关排气阀。将EXHAUST柄顺时针旋转直至停止，进一步扭紧确保安全。
注意：EXHAUST柄没关紧，开始灭菌后压力不上升，而且会报警。
8.  设置所需灭菌温度和灭菌时间。
9.  开始灭菌。按START键，灭菌显示仪闪烁显示灭菌操作开始。当温度达到预设温度，灭菌显示仪停止闪烁保持光亮。
10.  灭菌结束。灭菌完成机器自动鸣响提示，打开排气阀加快排气速度。
注意：如果锅内装有棉塞堵塞的试管，排气阀不可开太大，否则压力突然降低会使棉塞弹出或玻璃器皿破裂。
11.  灭菌完成。高压锅内蒸汽排完，压力指针指向0，温度显示90℃以下，打开锅盖散热。
12.  取出灭菌物品，关上电源和锅盖。做好使用记录。