人参中总皂甙的超声波快速提取方法研究

      长期以来，在人参总甙的测定方法中，总皂甙的提取过程一直是决定方法快慢的关键步骤。常用的提取方法有索氏提取法和超声波提取法。索氏法是经典的提取方法，应用范围较广，提取比较*；缺点是提取时间长，操作繁琐，约需2个工作日。超声波提取法大大缩短了提取时间，只需约1个工作日，提高了工作效率。本法采用甲醇作提取剂。研究了超声波提取的各种影响因素，建立了人参中总皂甙的半微量快速提取方法，将单一样品的分析时间进一步缩短为约lh，大大提高了分析速度及工作效率，节省试剂，降低了实验室劳动强度。与索氏提取法对照分析表明，本法不仅快速，而且也比较准确，对样品的提取和测定*符合一般测试要求。

1 试验部分

1．1 主要仪器与试剂

760MC双光束紫外分光光度计,超声波发生器，工作频率40kHz。香草醛一冰乙酸溶液：80g·L 人参皂甙（Re）标准品：纯度≥98 （吉林省药品检验所提供）人参皂甙标准溶液：lmg·ml ，称取人参皂甙标准品5．Qmg，用甲醇溶解并定容至5ml。其他试剂均为分析纯，水为一次蒸馏水。

1．2 样品中总皂甙的提取

称取供试样品约0．1OOg[粒度应通过60号筛（孔径0．25mm）]于10ml具塞试管中，准确加入甲醇2ml，加塞后放人超声波水浴中超声30min。然后取出试管置离心机中以1500r·min 离心15min，取出，备用。

1．3 样品测定

移取上清液50 l于10ml具塞试管中，放入水浴中挥干溶剂。取出后再依次加入香草醛一冰乙酸溶液0．2ml，高氯酸0．8ml，摇匀 置于60℃水浴中加热l5min。取出后于冷水中冷却至室温，再加入冰乙酸5ml，摇匀，于560nm 波长处测定吸光度，与人参中总皂甙的超声波快速提取方法研究标准对照，计算样品中总皂甙含量。

2 结果与讨论

2．1 取样量对超声提取效果的影响

与所有的声波一样，超声波在不均匀的介质中传播也会发生散射衰减。在对样品进行超声提取时，样品整体作为一种介质是各向异性的，即在各个方向上都不均匀，造成超声波的散射，因此，到达样品内部的超声能量会有一定程度的衰减，影响提取效果。由于本法采用10ml具塞试管作为样品提取时的容器，其截面积较小，当取样量大时，则样品厚度增大，到达样品内部的超声能量衰减也就越严重，提取效果越差。综合以上试验结果及其他因素，本法选择取样量为0．1g左右。

2．2 供试样品的细度对提取效果的影响

超声波不仅在两种介质的界面处发生反射和折射，而且在较粗糙的界面上还发生散射，引起能量的衰减_5]。在本法中，供试样品的细度将直接影响作用于样品中的超声波能量的大小。资料表明，当颗粒直径与超声波长的比值为l ～lO 时，这种散射很小；当比值大于lO 时，散射逐渐增大，造成能量大幅度衰减l53。本法所用超声波发生器工作频率为40kHz，经计算得知，当供试样品的细度为6O目时，其颗粒直径与超声波长的比值大约为1 ，此时提取效果较好；当细度小于6O目时，提取效果下降。此外，在较大的颗粒内部，溶剂的浸提作用也会明显减弱，这也是供试样品细度对提取效果产生影响的另一个重要原因。

2．3 提取时间的选择

通过对4个不同的人参样品，采用不同的提取时间来进行超声提取，结果表明，当超声提取时间达到30min时，即可达到较好的提取效果。

2．4 超声提取液直接显色及与标准品的光谱对照

文献中不论索氏提取法还是超声波提取法（采用正丁醇作提取剂），都要经过脱脂处理。本法采用甲醇作提取剂，由于甲醇的极性要高于正丁醇，脂类在甲醇中的溶解度要小于在正丁醇中的溶解度，并且本法取样量仅为0．1g（索氏提取法约2g，文献超声波法为1．0g），基体干扰水平低。可采取甲醇超声提取并离心后，直接吸取甲醇溶液进行显色测定，省去脱脂步骤，简化了试验操作，进一步缩短了检验时间。与索氏提取法并经脱脂处理的样品吸收光谱相对比，其形状相似，zui大吸收峰位置相同，同时也与标准品显色后的吸收光谱作了对比，结果表明本法省略了脱脂步骤是基本可行的。

2．5 方法对照试验

分别采用索氏提取法和超声波提取法（本法）进行人参总皂甙的9次平行测定试验，并将测定结果进行统计分析比较。结果表明，经t检验和F检验，两种方法之间无显著性差异。

2．6 综合提取效率比较

本法采用超声波提取法进行人参总皂甙测定，所用提取剂的量和样品量仅为索氏提取法的几十分之一，而单样分析速度则快十几倍左右；即使与文献超声波提取法相比，在分析速度和节省试剂方面也有较明显的优势，并且在进行成批样品分析时具有更大的优越性。