-86℃低温冰箱在冰冻切片上的应用

   随着超低温冰箱技术的不断发展，超低温冰箱在医用领域也逐渐被广泛应用。例如-86℃低温冰箱在冰冻切片上的应用，那就是冰冻切片环节中速冻，以减少冰晶形成。

    免疫组织化学染色中zui常用的一种切片方法，就是冰冻切片。它zui突出的优点，就是能够较完好地保存多种抗原的免疫活性，尤其是细胞表面抗原，更应采用冰冻切片。新鲜的组织及已固定的组织均可作冰冻切片。冰冻时，组织中水份易形成冰晶，往往影响抗原定位。一般认为冰晶少而大时，影响较小，冰晶小而多时，对组织结构损害较大，在含水量较多的组织中上述现象更易发生。冰晶的大小与其生长速率成正比，而与成核率（形成速率）成反比，即冰晶形成的数量愈多则愈小，对组织结构影响愈严重。因此，应尽量降低冰晶的数量。Fish认为冰冻开始时，冰晶成核率较慢，以后逐渐增加，其临界温度为-33℃，从-30℃降至-43℃之间，成核率急剧增加达1018，然后再减慢。基于上述理论可采取以下措施减少冰晶的形成。

（1）速冻，使组织温度骤降，缩短从-33℃到-43℃的时间，减少冰晶的形成。

其方法有二：

①干冰-丙酮（酒精）法：将150-200ml丙酮（酒精）装入小保温杯内，逐渐加入干冰，直至饱和呈粘稠状，再加干冰不再昌泡时，温度可达-70℃，用一小烧杯（50-100ml）内装异戊烷约50ml，再将烧杯缓慢置入干冰丙酮（纯酒精）饱和液内，至异戊烷温度达-70℃时即可使用。将组织（大小为1cm×0.8cm×0.5cm）投入异戊烷内速冻30-60s后取出，或置恒冷箱内以备切片，或置-86℃低温冰箱内贮存。

②液氮法：将组织块平放于软塑瓶盖或特制小盒内（直径约2cm），如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内，当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾，此时小盒保持原位切勿浸入液氮中，大约10-20s组织即迅速冰结成块。取出组织冰块立即置入-86℃低温冰箱贮存备用，或置入恒冷箱切片机冰冻切片。

-86℃低温冰箱参数：

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