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人中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

来源:齐一生物科技(上海)有限公司   2019年01月04日 11:34  

本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)含量。
实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)水平。用纯化的人中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入中性粒细胞弹性蛋白酶(NE),再与 HRP 标记的中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中人中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)浓度。

样本处理及要求:
1.血清:室温血液自然凝固 10-20 分钟,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2.血浆:应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合 10-20 分钟后,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3.尿液:用无菌管收集,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用 PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到 100 万/ml 左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

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