大鼠4-羟基雌二醇(4-OH-E2)试剂盒实验说明书

　　以下是关于‌大鼠4-羟基雌二醇(4-OH-E2)试剂盒‌的实验说明书核心内容整理：

　　一、实验原理‌

　　采用‌双抗体夹心法‌检测样本中4-OH-E2含量：

　　包被抗体的微孔板捕获样本中的4-OH-E2，形成固相抗体-抗原复合物‌;

　　加入HRP标记的抗体后，复合物与酶标抗体结合，经洗涤后加TMB显色‌;

　　颜色深浅与4-OH-E2浓度正相关，450nm波长下测定OD值‌。

　　二、试剂盒组成‌

　　组分‌ ‌规格‌ ‌用途‌

　　酶标包被板 12孔×8条 固相抗体载体‌

　　标准品(400ng/L) 0.5ml/瓶 绘制标准曲线‌

　　酶标试剂 6ml/瓶 HRP标记抗体‌

　　显色剂(TMB A/B液) 各6ml/瓶 显色反应‌

　　终止液 6ml/瓶 终止显色反应‌

　　三、样本处理要求‌

　　血清/血浆‌：EDTA抗凝血浆需5,000×g离心15分钟(4℃)，分离后-80℃保存‌;

　　稀释要求‌：样本需用试剂盒提供的稀释液按1:5比例稀释(如10μl样本+40μl稀释液)‌;

　　禁忌‌：含NaN3的样本会抑制HRP活性，需避免使用‌。

　　四、操作步骤‌

　　标准品稀释‌：将原倍标准品按梯度稀释至12.5-200ng/L‌;

　　加样‌：标准孔加50μl标准品，样本孔先加40μl稀释液，再加10μl样本‌;

　　温育‌：37℃孵育30分钟，洗涤5次‌;

　　显色‌：加入TMB A/B液各50μl，37℃避光显色15分钟‌;

　　终止与检测‌：加终止液50μl，15分钟内测定450nm OD值‌。

　　五、注意事项‌

　　重复冻融‌：样本避免反复冻融，-20℃保存需分装‌;

　　洗板‌：手工洗板需防止交叉污染，自动洗板机建议增加30秒浸泡步骤‌;

　　显色控制‌：TMB若变蓝则失效，终止后黄色需及时检测‌。

　　六、性能参数‌

　　灵敏度‌：<10pg/ml‌;

　　精密度‌：板内/板间变异系数<15%‌;

　　有效期‌：6个月(2-8℃避光保存)‌。

　　如需完整说明书，可下载原始文档或联系供应商‌。

　　注：以上资料仅供参考，不同品牌产品可能存在设计差异，操作前建议参考说明书‌。

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