鸡沙门氏菌抗体(Salmonella-Ab)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　鸡沙门氏菌抗体(Salmonella-Ab)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　一、实验原理

　　本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术，通过预包被沙门氏菌抗体的微孔板与样本中的目标抗体结合，再通过酶标二抗显色反应，最终通过吸光度值定量检测鸡血清/血浆中的沙门氏菌抗体水平。

　　二、试剂盒组成

　　组分规格保存条件

　　预包被微孔板96T/48T2-8℃密封

　　标准品(含阴性/阳性对照)6瓶(0-8.1ppb梯度)2-8℃

　　酶标二抗6ml2-8℃避光

　　TMB底物液A/B各6ml2-8℃避光

　　终止液(2M溶液)6ml室温

　　浓缩洗涤液(20×)20ml2-8℃

　　三、样本处理

　　血清/血浆：采集后室温静置2小时或4℃过夜，1000×g离心20分钟，取上清-20℃保存(避免反复冻融)。

　　组织匀浆：按1:9比例加入PBS，冰上研磨后5000×g离心5分钟取上清。

　　注意事项：溶血样本需离心过滤后使用。

　　四、操作步骤

　　加样

　　标准品孔：加入50μL不同浓度标准品(0-8.1ppb) 。

　　样本孔：先加40μL稀释液，再加入10μL样本(终稀释度5倍)。

　　孵育：37℃避光孵育60分钟，封板膜密封。

　　洗涤：弃液后每孔加满洗涤液，静置30秒，重复5次，拍干。

　　显色：每孔加TMB底物A/B各50μL，37℃避光显色15分钟。

　　终止：每孔加50μL终止液，立即测定OD450值。

　　五、关键注意事项

　　移液精度：使用校准后的移液枪(误差<2%)，枪头需“一头一换。

　　温度控制：试剂需提前30分钟恢复室温，避免水浴加热。

　　避光操作：TMB底物全程避光，显色时用锡纸覆盖酶标板。

　　安全防护：终止液含强酸，需戴手套操作。

　　六、结果分析

　　以标准品浓度(ppb)为横坐标，OD450值为纵坐标绘制标准曲线。

　　样本浓度通过曲线方程计算，OD值超出标准曲线范围时需稀释复测。

　　七、贮存与有效期

　　未开封试剂盒：2-8℃保存6个月。

　　开封后微孔板：密封干燥保存，避免受潮。