大鼠低氧诱导因子1α(HIF-1α)ELISA试剂盒技术说明书

　　大鼠抗心磷脂抗体IgG(ACA-IgG)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-3236大鼠抗心磷脂抗体IgG(ACA-IgG)ELISA试剂盒

　　一、实验原理

　　本试剂盒采用双抗体夹心法检测大鼠血清/血浆中的ACA-IgG抗体。微孔板预包被大鼠ACA-IgG抗体，依次加入样本、酶标二抗，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经TMB显色后，450nm波长下测定吸光度(OD值)，与标准曲线对比计算浓度。

　　二、试剂组成

　　组分规格与特性

　　预包被微孔板96孔/板，包被纯化大鼠ACA-IgG抗体

　　标准品6个浓度梯度(含最高浓度20μg/mL)，含NaN3防腐剂

　　酶标二抗HRP标记抗ACA-IgG抗体，含0.02%硫柳汞

　　TMB显色液含ABTS或TMB底物，避光保存

　　终止液0.25M草酸或2M H2SO4

　　洗涤液20倍浓缩PBS，含0.1%叠氮钠

　　三、操作步骤

　　样本准备

　　血清/血浆样本需离心(3000g×10min)去除颗粒物，避免溶血。

　　使用前用样本稀释液(含10%小牛血清的PBS)按1:10稀释。

　　加样与孵育

　　每孔加入100μL标准品/样本，阴性/阳性对照设复孔。

　　37℃振荡孵育30min，避免蒸发(湿度>60%)。

　　洗涤

　　机洗5次，每次300μL洗涤液，静置30s后拍干。

　　显色与检测

　　每孔加100μL酶标二抗，37℃孵育30min后重复洗涤。

　　加入TMB显色液避光反应15min，终止液终止反应。

　　450nm读取OD值，绘制标准曲线计算样本浓度。

　　四、注意事项

　　有效期：试剂盒2-8℃保存，有效期10-18个月(避免冻结) 。

　　交叉污染：不同批号试剂不可混用，加样需更换枪头。

　　环境控制：室温平衡试剂30min，避免强光照射显色液。

　　结果异常：若空白孔OD值>0.15，可能洗涤不或试剂污染。

　　五、性能参数

　　灵敏度：检测限≤0.5μg/mL。

　　线性范围：标准曲线R²≥0.99。

　　重复性：批内/批间CV均<15%。

　　注：以上仅供参考，不作为实际数据!

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