人谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)ELISA检测试剂盒技术说明书

　　人谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)ELISA检测试剂盒技术说明书

　　BS-9843 人谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)ELISA试剂盒

　　产品概述

　　本试剂盒采用双抗体一步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)‌，用于体外定量检测人血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液及细胞培养上清等样本中的谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)浓度。GPX4是谷胱甘肽过氧化物酶家族的关键成员，通过催化还原型谷胱甘肽(GSH)清除脂质过氧化物，在抑制铁死亡、维持细胞膜完整性及抗氧化应激中发挥核心作用‌。

　　检测原理

　　双抗体夹心法‌：包被抗体与样本中GPX4结合，生物素标记抗体形成复合物，辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素催化显色反应，显色强度与样本中GPX4浓度成正比‌。

　　特异性‌：可特异性识别GPX4，与类似物无交叉反应，确保检测准确性‌。

　　试剂盒组成

　　组分 规格/描述

　　预包被微孔板 96孔板，含抗人GPX4抗体

　　标准品 冻干粉，重组人GPX4蛋白，临用前用稀释液复溶

　　生物素标记抗体 液体，HRP标记抗人GPX4抗体

　　显色底物(TMB) 液体，3,3',5,5'-四甲基联苯胺溶液

　　终止液 2M硫酸溶液

　　洗涤缓冲液 20×浓缩液，含吐温-20

　　样本稀释液 缓冲液，用于稀释高浓度样本

　　封板膜 透明，用于微孔板密封

　　样本处理与保存

　　样本类型‌：血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清等‌。

　　处理方法‌：

　　血清/血浆：室温凝固后离心(3000 rpm，10分钟)，取上清。

　　组织匀浆：用生理盐水制备10%匀浆液，离心取上清。

　　细胞裂解液：裂解后离心(15000 rpm，10分钟)，取上清。

　　保存条件‌：短期(≤7天)2-8℃保存，长期(>7天)需分装-20℃冻存，避免反复冻融‌。

　　操作步骤

　　标准品稀释‌：用样本稀释液将标准品依次稀释为1000 pg/mL、500 pg/mL、250 pg/mL、125 pg/mL、62.5 pg/mL、31.25 pg/mL、15.63 pg/mL，0 pg/mL为空白对照‌。

　　加样‌：每孔加入100 μL标准品或样本，37℃孵育90分钟。

　　洗涤‌：弃去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复5次，拍干。

　　加生物素标记抗体‌：每孔加入100 μL生物素标记抗体，37℃孵育60分钟。

　　加显色底物‌：每孔加入90 μL TMB底物，37℃避光孵育15-30分钟。

　　终止反应‌：每孔加入50 μL终止液，混匀后立即测定吸光度。

　　结果计算

　　仪器设置‌：酶标仪波长450 nm(参考波长630 nm)。

　　数据处理‌：以标准品浓度(pg/mL)为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线。样本浓度通过曲线方程计算，乘以稀释倍数‌。

　　灵敏度‌：7.69 pg/mL，检测范围15.62-1000 pg/mL‌。

　　注意事项

　　交叉反应‌：不与GPX1、GPX2、GPX3等类似物发生交叉反应‌。

　　操作规范‌：

　　洗涤需干净，避免残留液体影响结果。

　　显色时间控制在15-30分钟，避免过度显色导致数据偏差。

　　样本避免反复冻融，以防蛋白降解。

　　质量控制‌：建议每批次实验设置双孔复测，CV值<10%为合格‌。

　　储存条件

　　未开封试剂盒：2-8℃避光保存，有效期6个月。

　　开封后：标准品、抗体、底物等组分按说明书要求分装保存，避免反复冻融‌。

　　本说明书仅用于科研用途，不适用于临床诊断。操作前请仔细阅读完整说明书，并遵守实验室安全规范。

　　注：供科研使用，以上资料供参考。

　　人谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)ELISA试剂盒本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。