人γ干扰素(IFN-γ)ELISA检测试剂盒实验使用说明书

　　人γ干扰素(IFN-γ)ELISA检测试剂盒实验使用说明书

　　BS-0033人γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒

　　一、实验原理

　　本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测人γ干扰素(IFN-γ)水平。实验步骤如下：

　　包被抗体‌：将抗人IFN-γ单克隆抗体预包被于微孔板，形成固相抗体。

　　抗原结合‌：加入样本或标准品，IFN-γ与固相抗体结合。

　　酶标抗体反应‌：加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。

　　显色与检测‌：加入底物TMB显色，HRP催化TMB转化为蓝色，酸终止后变黄色。颜色深浅与IFN-γ浓度正相关，用酶标仪在450nm波长测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样本浓度。

　　二、试剂盒组成

　　预包被微孔板‌：12孔×8条(96孔配置)或12孔×4条(48孔配置)，2-8℃保存。

　　标准品‌：冻干粉，复溶后配制梯度浓度(如1000→500→250→…→15.625 pg/mL)，2-8℃保存。

　　酶标试剂‌：HRP标记的检测抗体，2-8℃避光保存。

　　显色底物‌：TMB溶液，避光保存。

　　终止液‌：2M溶液，操作时需戴手套。

　　其他‌：封板膜、洗涤液(20×浓缩液)、样本稀释液、说明书。

　　三、样本收集与处理

　　样本类型‌：

　　血清‌：室温血液自然凝固10-20分钟，离心(2000-3000转/分，20分钟)，收集上清。

　　血浆‌：EDTA或肝素抗凝，离心后取上清。

　　细胞培养上清‌：离心去除颗粒物，避免反复冻融。

　　其他体液‌(如脑脊液、胸腹水)：澄清后检测。

　　保存‌：短期(≤7天)2-8℃保存，长期需分装冻存于-80℃，避免反复冻融。

　　四、实验步骤

　　试剂准备‌：

　　洗涤液：将20×浓缩液用蒸馏水稀释为1×工作液。

　　标准品：冻干粉加1mL标准品稀释液复溶，梯度稀释(如1000→500→…→15.625 pg/mL)。

　　加样‌：

　　标准品孔：各加50μL不同浓度标准品。

　　样本孔：加10μL样本+40μL样本稀释液(血清/血浆建议1:5稀释，细胞上清1:2稀释)。

　　温育‌：37℃避光孵育30分钟。

　　洗涤‌：甩干孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置1分钟后甩干，重复5次，拍干。

　　酶标抗体‌：每孔加50μL酶标试剂，37℃孵育30分钟。

　　显色‌：每孔加50μL显色底物，37℃避光孵育15分钟。

　　终止‌：每孔加50μL终止液，混匀后立即测定OD值(450nm)。

　　五、结果计算

　　标准曲线‌：以标准品浓度为横坐标(X)，OD值为纵坐标(Y)，拟合直线回归方程。

　　样本浓度‌：将样本OD值代入方程，乘以稀释倍数，得到实际浓度(pg/mL)。

　　六、注意事项

　　试剂保存‌：未使用板条密封保存于2-8℃，避免受潮;TMB避光。

　　样本处理‌：避免溶血、高血脂样本;高浓度样本需预实验确定稀释倍数。

　　操作规范‌：

　　加样避免气泡，枪头一次性使用。

　　温育时间严格控制在规定范围内，防止蒸发。

　　洗涤，拍干时避免吸水纸直接接触孔内。

　　质量控制‌：每批次设空白孔(S0)及阴性对照。

　　安全提示‌：终止液含酸，需戴手套操作;废弃物按生物危害处理。

　　七、性能参数

　　灵敏度‌：≤1.0 pg/mL。

　　检测范围‌：15.63–1000 pg/mL。

　　精密度‌：板内/板间变异系数<10%。

　　回收率‌：83%-113%。

　　特异性‌：不与IL-2、IL-4等细胞因子交叉反应。

　　八、有效期

　　试剂盒在2-8℃下有效期为6个月，拆封后标准品建议分装冻存于-20℃。

　　注：以上仅供参考，本产品仅供科研使用，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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