大鼠组蛋白H2b(histon-H2b)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　大鼠组蛋白H2b(histon-H2b)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-3204  大鼠组蛋白H2b(histon-H2b)ELISA试剂盒

　　一、试剂盒简介

　　本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)技术，用于定量检测大鼠血清、血浆或组织匀浆样本中的组蛋白H2b(histon-H2b)含量。

　　二、试剂盒组成

　　预包被抗体的96孔微孔板

　　标准品(不同浓度梯度)

　　辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体

　　20×洗涤缓冲液

　　TMB显色底物

　　终止液

　　封板膜

　　说明书

　　三、储存条件

　　未开封试剂盒：2-8℃避光保存，有效期6个月

　　已开封试剂盒：

　　标准品、检测抗体：-20℃保存

　　微孔板：干燥剂密封后-20℃保存

　　其他组分：2-8℃保存

　　使用前所有试剂需平衡至室温(20-25℃)

　　四、样本处理

　　1. 血清样本

　　采集后室温静置10-20分钟

　　2000-3000rpm离心20分钟

　　小心吸取上清，避免溶血

　　如有沉淀需再次离心

　　2. 血浆样本

　　使用EDTA或肝素抗凝

　　混合后离心条件同血清

　　避免使用叠氮钠作为防腐剂

　　3. 组织样本

　　称取组织重量后加入PBS(pH7.4)

　　液氮速冻后研磨匀浆

　　离心取上清(建议1:3-1:5稀释)

　　五、实验步骤

　　1. 试剂准备

　　洗涤液配制：将20×浓缩液用蒸馏水按1:19稀释(1份浓缩液+19份水)

　　2. 加样

　　取出平衡后的微孔板，设置标准品孔、样本孔和空白孔

　　标准品孔：加入50μL不同浓度标准品

　　样本孔：加入50μL待测样本

　　空白孔：不加任何试剂

　　3. 温育

　　每孔加入100μL HRP标记检测抗体

　　封板膜密封，37℃恒温箱温育60分钟

　　4. 洗涤

　　弃去孔内液体，吸水纸拍干

　　每孔加入350μL洗涤液，静置1分钟

　　重复洗涤5次(手工或洗板机操作)

　　5. 显色

　　每孔加入90μL TMB底物，37℃避光显色15-20分钟

　　加入50μL终止液终止反应

　　6. 测定

　　450nm波长测定各孔OD值

　　空白孔调零

　　六、结果计算

　　以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线

　　样品OD值代入标准曲线方程计算浓度

　　若样本OD值超出标准范围，需用样本稀释液稀释后重测，结果乘以稀释倍数

　　七、注意事项

　　所有操作需在生物安全柜中进行，废弃物按传染性物质处理

　　不同批号试剂不可混用

　　显色液需避光保存

　　封板膜一次性使用

　　实验前需预实验确定样本稀释倍数

　　建议设置复孔检测

　　八、性能指标

　　灵敏度：≤0.1 ng/mL

　　检测范围：0.3-20 ng/mL

　　批内变异系数：<9%

　　批间变异系数：<11%

　　回收率：85-115%

　　九、常见问题处理

　　高背景：检查洗涤是否充分，底物是否污染

　　低信号：确认抗体活性，检查温育时间

　　异常值：重复检测，确认样本处理过程

　　(注：本说明书为通用版本，具体操作请以实际试剂盒附带说明书为准)

　　注：供科研使用，以上资料供参考，不作为实验依据，具体请咨询技术老师或品牌商。

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