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齐一生物人血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C)检测试剂盒工作液准备
7.1 AFB1标准品溶液:0ng/ml,0.1ng/ml ,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1ng/ml
7.2 浓缩洗涤液:用蒸馏水按1:20(1+19)稀释备用
7.3 样本稀释液:用蒸馏水按1:10(1+9)稀释备用
7.3 显色剂:已备用,避免光线直照
7.4 反应终止液:已备用
8 样品处理程序(样品在提取过程中,要严格按说明书操作,提取过程中应准确稀释,否则会出现结果不准确,样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存)
8.1取10g粉碎的样品,加 20ml 70%甲醇溶液
8.2强力振荡3分钟
8.3用Whatman 滤纸过滤
8.4取100μl处理后的样品,加入400μl样本稀释液
8.5取50μl稀释液进行分析(稀释倍数10)
9 酶免分析步骤
9.1 实验须知
9.1.1 实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复室温(25±2℃),时间约2小时。回温室温(25±2℃)后再取出微孔条,多余的微孔条重新密封立即于2~8℃干燥保存
注:一定保证回温充分,否则影响检测的精确度和准确度。
9.1.2 使用后请立即将试剂放回2~8℃保存
9.1.3 请不要改变分析程序
9.1.4 请使用精确的微量移液器
9.1.5 操作一旦开始,请不要中断任何程序
9.1.6 ELISA结果的可重复性极大程度的取决于操作程序,请严格按照要求操作
9.1.7 为避免交叉污染,每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样
9.1.8 加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面
9.2 分析步骤
9.2.1 预先进行编号,标记B0、标准品和样品的位置,推荐进行双孔检测
9.2.2 取所需数量的微孔(微孔条可拆),将多余板条重新密封并立即放回2~8℃保存
9.2.3 样品稀释液(10×)、浓缩洗涤液(20×)稀释成工作液(蒸馏水或去离子水稀释)
9.2.4 在B0孔中加入50μl0.0 ng/ ml标准品溶液
9.2.5 在各标准孔中加入50μl的标准品溶液
9.2.6 在各样品孔中加入50μl样品溶液
9.2.7 在所有孔中加入50μl的抗本产品抗体酶结合物
9.2.8 轻轻晃动反应板几秒钟。
9.3 37℃温浴30min (温浴过程中不时轻拍反应板,可以减少双孔误差)
9.3.1 甩掉孔中液体,用洗液洗涤微孔板5次,zui后一次应在吸水纸上拍打以*除去孔中液体。
9.4 反应
9.4.1 洗涤程序完成后,立即用微量移液器在每个微孔中先加入50μl显色液A,再加 50μl显色液B;轻微晃动反应板使之*混匀
9.4.2 37℃温浴10min
9.4.3 每孔中加入50μl终止液,混匀
9.4.4 在450nm下检测吸光度,结果在5min内读取Pierce PA129634 Rat IgG Fab fragment (Biotin) 500 μg
Pierce PA129639 DR5 50 μg
Pierce PA129640 Angiopoietin 2 100 μl
Pierce PA129653 GSF3 50 μg
Pierce PA129657 LIX 100 μg
Pierce PA129662 beta 2 Microglobulin (HRP) 250 μg
Pierce PA129668 MAGE 1 50 μg
Pierce PA129677 Tet Repressor 100 μg
Pierce PA129680 Lysozyme 500 μl
Pierce PA129715 C3 1 ml
Pierce PA129718 C3c (FITC) 1 ml
Pierce PA129720 C1q 1 ml
Pierce PA129725 NFY 50 μg
Pierce PA129726 RBL2 50 μl
Pierce PA129737 p450 control 100 μl
Pierce PA129738 Dog IgG H&L (HRP) 500 μg
Pierce PA129740 Haptoglobin 100 μg
Pierce PA129741 Mouse IgA 500 μg
Pierce PA129751 Pierce(R) Anti-HA (HRP) RabbitPolyclonal Antibody, 100 ug 100 μg
Pierce PA129768 Orphanin FQ 50 μl
Pierce PA129769 P2X3 50 μl
Pierce PA129770 VR1 50 μl
Pierce PA129771 CCR4 50 μg
Pierce PA129778 Lymphotactin 50 μg
Pierce PA129780 EphA6 50 μg
Pierce PA129783 EphB6 50 μg
Pierce PA129786 TRPC6 50 μl
Pierce PA129791 Dicer 100 μg
Pierce PA129792 POR 50 μl
Pierce PA129793 Bcl2L2 50 μg
Pierce PA129794 HSPE1/Cpn10 100 μl
Pierce PA129797 MBD1 100 μg
Pierce PA129799 INHAT1 200 μl
Pierce PA129801 TRF41 100 μg
Pierce PA129807 Puma gamma 200 μl
Pierce PA129808 DUT-N 100 μg
Pierce PA129809 APEX2 200 μl
Pierce PA129811 Porimin 200 μl
Pierce PA129812 SIRT5 100 μg
Pierce PA129815 Ligase 1 200 μl
Pierce PA129817 Bcl3 200 μl
Pierce PA129818 TNFRSF12A 200 μl
Pierce PA129820 ASB11 100 μg
Pierce PA129823 ASB3 100 μg
Pierce PA129824 RISC 100 μg
Pierce PA129825 SIGIRR 200 μl
Pierce PA129826 SMAD8 100 μl
Pierce PA129829 SMAD6 200 μl
Pierce PA129830 SET7 /SET9 200 μl
Pierce PA129834 TBLR1 100 μg
Pierce PA129840 TXNDC5 100 μg
Pierce PA129841 NUR77 200 μl
Pierce PA129843 IL-21-R 200 μl