己烯雌酚类检测试剂盒

己烯雌酚类检测试剂盒

使用说明书

（酶联免疫法）

 1 原理及用途

己烯雌酚类检测试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测组织样本中的己烯雌酚（Diethylstilbestrol，DES），试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的己烯雌酚和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗己烯雌酚抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含己烯雌酚含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中己烯雌酚的残留量。

2 技术指标

2.1 灵敏度：0.05ppb(ng/ml) 

2.2 反应模式：25℃，30min～30min～15min

2.3 检测下限：

组织（虾、鱼） 0.2ppb

3 组成

酶标板 96孔

标准品：6瓶

高标准液：1瓶

酶标记物1瓶

抗体工作液1瓶

底物液A 1瓶

底物液B 1瓶

终止液1瓶

浓缩洗涤液1瓶

说明书 1份

4 需要的器材和试剂

4.1 仪器：酶标仪、打印机、均质器 、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）

4.2 微量移液器：单道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道300µl

4.3 试剂：甲醇、乙腈、氢氧化钠、丙酮、浓磷酸（含量85%）

5 酶联免疫试验步骤

    将所需试剂从4℃冷藏环境中取出，置于室温平衡30min以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解，每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。

5.1 编    号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

5.2 加样反应：加标准品应用液或样本50µl/孔到各自的微孔中，然后加抗体工作液50µl/孔，轻轻振荡5秒混匀，25℃避光反应30分钟。

5.3 洗    涤：将孔内液体甩干，用工作洗涤液250µl/孔充分洗涤5次，每次间隔30秒，zui后用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。

5.4 加酶反应：加酶标记物100µl/孔，25℃避光反应30分钟。

5.5 洗    涤：同上

5.6 显    色：加底物液A 50µl/孔，再加底物液B 50µl/孔，轻轻振荡5秒混匀，25℃避光显色15分钟（若蓝色过浅，可适当延长反应时间）。

5.7 终    止：加终止液50µl/孔，轻轻振荡混匀，终止反应。

5.8 测吸光值：用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值（建议用双波长450/630nm）。测定应在终止反应后10分钟内完成。

6 结果分析

6.1 百分吸光率的计算

    标准液或样本的百分吸光率等于标准液或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以*个标准液（0ppb）的吸光度值，再乘以*，即

A—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值

A0—0ppb标准溶液的平均吸光度值

6.2 标准曲线的绘制与计算

    以标准液百分吸光率为纵坐标，对应的标准液浓度（ppb）的对数为横坐标，绘制标准液的半对数曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中待测物的实际浓度。

    若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。（索取）

7 贮藏及保存期

储藏条件：于2-8℃保存，避免冷冻。

保 质 期：该产品有效期为1年，生产日期见包装盒。