重组蛋白A/G预装柱rProtein A/G

重组蛋白A/G预装柱规格

目录号	规格	产品形式
rP A/G-001	1mL	预装柱
rP A/G-002	5mL	预装柱
rPA/G-005	5mL	填料
rPA/G-025	25mL	填料
rPA/G-100	100mL	填料

生产批次：见产品标签
有效期：4℃长期存放，有效期三年

重组蛋白A/G预装柱简介

产品简介

通过基因重组技术，将蛋白A与蛋白G基因重组于同一质粒载体中，并在大肠杆菌中进行表达，得到分子量为50.5KDa的可溶性蛋白A/G。该可溶性蛋白A/G具有四个IgG结合位点，来自于蛋白A；和两个IgG的结合位点，来自于蛋白G。因具有上述特性，使得基因工程重组蛋白A/G具有广泛的IgG的结合能力，对各种哺乳类动物的IgG都能结合，使得该产品在IgG的诊断和纯化中具有十分广泛的用途。
本产品采用“高配基、高浓度、小体积”的创新偶联技术，将填料中有限的羟基(-OH)结合位点充分活化，使得单位体积中结合更多蛋白A/G，产品最终纯化效率较普通偶联有30%的提高。蛋白A或蛋白G、蛋白A/G偶联填料可直接用于血清、腹水中IgG抗体纯化，或用于含Fc片段的重组蛋白的纯化。

产品技术指标

rec-Protein A/G per Sepharose 4FF 比值：
4.0-4.5mg rec-Protein A/G per ml Sepharose 4FF
结合能力：
35-50mg人IgG / ml填料
38-51mg兔IgG / ml填料
5.5-18.5mg鼠血清IgG/ml填料
4.5-17.8mg鼠腹水IgG/ml填料
rec-Protein AG分子量：
50.5 KDa
每分子rec-Protein G可结合IgG位点数：
6个（4个来自于蛋白A，2个来自于蛋白G）
rec-Protein A可结合白蛋白位点数：
无
线性流速：
300-500 cm/h
耐压指数：
0.3 MPa

产品保存

产品储存于2-8℃

rProtein A/G-Sepharose 4FF纯化IgG抗体步骤

以下方法适用于从血清或腹水中纯化IgG抗体，不同来源的IgG与rProteinA/ G的结合能力不同，具体情况请参考表1。
1. 将血清或腹水样品（推荐上样量2 mL样品/mL柱）装入截留分子量3.5 KDa透析带中，于4 ℃冰箱中对1× PBS（pH 7.4）透析过夜；
2. 将rProtein A/G-Sepharose 4FF装柱固定好，用10倍柱体积1× PBS（pH 7.4）平衡层析柱，建议流速为1 mL/min；
3. 将透析好的样品从层析柱上端加入，建议流速为1 mL/min，为了获得更好的抗体结合效果可将流穿液再上样，重复2遍（或者是将样品1次性加入层析柱后置于摇床上，轻轻摇动，结合30 min）；
4. 样品结合后，用20倍柱体积1× PBS(pH 7.4)洗涤层析柱，建议流速为1 mL/min，勿让层析柱滴干；
5. 洗脱IgG，向层析柱上端加入洗脱液（100 mM甘氨酸，pH 2.7），用预先加有100 μL中和缓冲液（1M Tris，pH 9.0）的4 mL Ep管接收，2 mL /管，共收集10倍柱体积，进行10 % SDS-PAGE电泳，确定IgG样品所在管，回收样品。
6. 加入5倍柱体积再生缓冲液（100 mM甘氨酸，pH 2.0），再加入10倍柱体积ddH2O清洗层析柱。 向层析柱加入10倍柱体积, 20% Ethanol，于4~8 ℃冰箱。

表1 rProtein A/G 与Ig结合能力情况

IgG类型	Protein A	Protein G	IgG类型	Protein A	Protein G
人 IgG1	++++	++++	大鼠 IgG2b	-	++
人 IgG2	++++	++++	大鼠 IgG2c	+	++
人IgG3	-	++++	大鼠 IgM	+/-	-
人IgG4	++++	++++	兔 Ig	++++	+++
人IgA	++	-	鸡 Ig	-	+
人n IgD	++	-	仓鼠 Ig	+	++
人IgE	++	-	豚鼠 Ig	++++	++
人 IgM	++	-	牛 Ig	++	++++
小鼠 IgG1	+	++++	马	++	++++
小鼠 IgG2a	++++	++++	奶牛	++	++++
小鼠 IgG2b	+++	+++	猪	+++	+++
小鼠 IgG3	++	+++	绵羊	+/-	++
小鼠 IgM	+/-	-	山羊	-	++
大鼠 IgG1	-	+
大鼠 IgG2a	-	++++

表2 rProtein A/G预装柱系列产品参数

特性	rProtein A/G	特性	rProtein A
柱体积规格	1mL，5mL	填料稳定性	＞20纯化周期
基质组成	4%高交联度琼脂糖	pH稳定性	pH 2~11
基质平均粒径	90μm	推荐工作pH范围	pH 3~10
功能集团	rProtein A/G：50.5kDa； IgG结合位点：6个	推荐在位清洗pH范围	pH 2~11
配基密度	≈3mg rProtein A/mL 基质	工作温度	4~40℃
结合能力	35-50mg人IgG/mL填料	运输条件	20%乙醇浸泡，室温运输
推荐流速	30~150cm/mL	贮藏条件	20%乙醇条件下， 4~8℃保存