植物β-葡萄糖苷酸酶(β-GUS)ELISA试剂盒

　　以下是‌植物植物β-葡萄糖苷酸酶(β-GUS)ELISA试剂盒的标准操作流程及关键要点：

　　BS-5023 植物β-葡萄糖苷酸酶(β-GUS)ELISA试剂盒

　　一、实验原理‌

　　采用‌双抗体夹心法‌：包被抗体捕获样本中的GUS后，加入HRP标记检测抗体形成复合物，TMB显色(蓝色→黄色)，450nm波长下OD值与GUS浓度正相关。

　　二、样本处理‌

　　组织提取‌：

　　取5-50mg叶片/愈伤组织，加入GUS缓冲液匀浆，16000×g离心15分钟取上清。

　　蛋白浓度调整为0.1mg/mL后立即检测或-80℃保存。

　　保存要求‌：

　　避免使用含NaN3的样本(抑制HRP活性)。

　　短期保存于-20℃，避免反复冻融。

　　三、操作步骤‌

　　加样‌：

　　空白孔不加样，标准孔加梯度标准品(如1.0ng/mL起始)，样本孔加50μL(需预稀释时计算稀释倍数)。

　　温育‌：

　　37℃孵育30分钟，手工洗涤时需拍干，推荐使用含0.05%吐温-20的洗涤液。

　　显色‌：

　　加入TMB避光显色15分钟，终止后15分钟内读取OD值。

　　四、注意事项‌

　　试剂管理‌：

　　使用前室温平衡30分钟，不同批号试剂禁止混用。

　　底物B需严格避光，避免接触金属器械。

　　操作控制‌：

　　加样需精准(推荐排枪)，避免气泡或孔壁残留。

　　显色后若标准孔OD值异常，需检查温育温度或洗涤效果。

　　五、性能参数‌

　　灵敏度‌：检测浓度≤1.0ng/mL。

　　重复性‌：板内/板间变异系数<10%。

　　如需GUS染色实验方案(如X-Gluc法)，可进一步说明需求。

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