ELISA实验要点：血液样本收集/处理简要?

　　ELISA实验要点：血液样本收集/处理简要?

　　在ELISA实验中，血液样本的收集至关重要。需使用无热原、无内毒素的试管或离心管采集静脉血，室温放置1小时或4℃过夜，使血清析出。随后，在2-8℃条件下以1000×g离心20分钟，收集上清液作为血清样本。若采集血浆，则需使用含抗凝剂的采血管，采集后30分钟内，在4℃条件下以1000×g离心15分钟，取上清液。此外，还需注意避免溶血和细菌污染，溶血会释放具有过氧化物酶活性的物质，细菌可能含有内源性HRP，这些都会影响检测结果。处理后的血清或血浆应分装保存于-20℃或-80℃，避免反复冻融。

　　ELISA实验的血液样本收集与处理是确保实验结果准确的关键步骤，以下为简要操作要点：

　　一、血液样本收集

　　采集类型：

　　血清：用于检测抗体、抗原等(如无抗凝管采集)。

　　血浆：需抗凝剂(如EDTA、肝素、柠檬酸钠)防止凝固，用于特定分子检测(如细胞因子)。

　　注意事项：

　　无菌操作：避免污染。

　　采血管选择：根据检测目标选择抗凝剂(避免EDTA干扰某些酶联反应)。

　　采集量：通常3-5mL，避免溶血或脂血(影响吸光度)。

　　二、样本处理

　　血清制备：

　　血液静置30-60分钟(室温凝固)。

　　离心(2000-3000×g，10-15分钟，4℃或室温)。

　　吸取上清(血清)，避免触碰沉淀或脂层。

　　血浆制备：

　　采血后立即轻柔颠倒混匀抗凝剂。

　　离心(同上条件)分离血浆。

　　分装保存：

　　分装至无菌EP管(避免反复冻融)。

　　短期(24-48小时)：4℃保存。

　　长期：-20℃(1个月内)或-80℃(更久)，标记日期/样本信息。

　　三、关键控制点

　　避免溶血/脂血：离心后若血清呈红色或浑浊，可能影响OD值。

　　及时处理：血液室温放置≤2小时，否则释放代谢物干扰结果。

　　冻融次数：≤3次，建议分装小体积。

　　四、实验前准备

　　检测前样本需平衡至室温，离心去除沉淀(尤其冻存样本)。

　　高脂样本可过滤或超速离心澄清。

　　规范化的样本处理可显著减少ELISA的假阳性/假阴性风险。根据具体试剂盒要求调整细节(如某些检测需特殊抗凝剂)。

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