自备物品 1.酶标仪（尽量提前预热） 2.微量加液器、吸头 3.蒸馏水或去离子水以及滤纸
操 作 步 骤
1. 取出试剂盒，于室温（20-25℃）放置15-30分钟。实验过程应在室
温（20-25℃）内进行。
2. 取出酶标板，按照标准品的次序分别加入100μl的标准品溶液于空白微孔中。
3. 空白微孔中加入100μl的样品，空白对照加入100μl的蒸馏水；
4. 在各孔中加入50μl的酶标记溶液；（不含空白对照孔）
5. 将酶标板用封口胶密封后，37℃孵育反应 1小时；（在孵育箱中保持稳定的温度与湿度）
6. 充分清洗酶标板3-5次，保持各孔有充足的水压；（浓缩洗涤液以1：100的比例与蒸馏水稀释）
7. 酶标板洗涤后用吸水纸*拍干；
8. 各孔加入显色剂A、B液各50μl；（不含空白对照孔）
9. 20-25℃下避光反应15分钟；
10. 各孔加入50μl终止液，终止反应；
结 果 判 断
1. 30分钟内在波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值； 2. 百分结合率计算：设S0管计数为B0，各标准管或样品管计数为B，非特异管计数为NSB，则百分结合率计算公式如下：B/ B0=（B－NSB）/（ B0－NSB）×* 3. logit计算:各标准点或样品管的logit值计算公式如下:logit=ln（B/ B0）/（1－B/ B0）
4. 将标准品的OD均值与标准品0点的OD均相除，为标准点的百分结合率，在log-logit坐标纸上绘图。
5. Log-logit双对数标准曲线：坐标纸上横轴从左至右*个1-9表示为*个10进位，第二个1-9表示为第二个10进位。第三个1-9表示为第三个10进位。坐标纸纵轴为百分比（1-99），即各标准吸光值的百分结合率。取一条通过各点的直线。要求尽可能多的点在线上，同时剩余的点均匀分布在直线的两边。样品也同样由吸光值计算百分结合率，再从纵轴上的相应结合率找到直线上的点，此点对应的横坐标浓度即为样品的浓度，无须换算。