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更新时间:2018-05-14 09:00:00浏览次数:2290
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人血管生成素2(ANG-2)ELISA 试剂盒
试 剂 组 成
自备物品 1.酶标仪(尽量提前预热) 2.微量加液器、吸头 3.蒸馏水或去离子水以及滤纸 操 作 步 骤 1. 取出试剂盒,于室温(20-25℃)放置15-30分钟。实验过程应在室温(20-25℃)内进行。 2. 取出酶标板,按照标准品的次序分别加入100μl的标准品溶液于空白微孔中。 3. 空白微孔中加入100μl的样品,空白对照加入100μl的蒸馏水; 4. 在各孔中加入50μl的酶标记溶液;(不含空白对照孔) 5. 将酶标板用封口胶密封后,37℃孵育反应 1小时;(在孵育箱中保持稳定的温度与湿度) 6. 充分清洗酶标板3-5次,保持各孔有充足的水压;(浓缩洗涤液以1:100的比例与蒸馏水稀释) 7. 酶标板洗涤后用吸水纸*拍干; 8. 各孔加入显色剂A、B液各50μl;(不含空白对照孔) 9. 20-25℃下避光反应15分钟; 10. 各孔加入50μl终止液,终止反应; 结 果 判 断 1. 30分钟内在波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值; 2. 百分结合率计算:设S0管计数为B0,各标准管或样品管计数为B,非特异管计数为NSB,则百分结合率计算公式如下:B/ B0=(B-NSB)/( B0-NSB)×* 3. logit计算:各标准点或样品管的logit值计算公式如下:logit=ln(B/ B0)/(1-B/ B0) 4. 将标准品的OD均值与标准品0点的OD均相除,为标准点的百分结合率,在log-logit坐标纸上绘图。 5. Log-logit双对数标准曲线:坐标纸上横轴从左至右*个1-9表示为*个10进位,第二个1-9表示为第二个10进位。第三个1-9表示为第三个10进位。坐标纸纵轴为百分比(1-99),即各标准吸光值的百分结合率。取一条通过各点的直线。要求尽可能多的点在线上,同时剩余的点均匀分布在直线的两边。样品也同样由吸光值计算百分结合率,再从纵轴上的相应结合率找到直线上的点,此点对应的横坐标浓度即为样品的浓度,无须换算。 6. 人工处理:以标准浓度取log值为横坐标,对应的logit值为纵坐标在普通坐标纸上或以标准浓度为横坐标,对应的B/B0为纵坐标在logit-log坐标纸上画出标准曲线(理想化时是一条直线)。根据待测样品的B/B0可以从坐标纸上查出样品的浓度值。如果使用普通坐标纸,查出的数值应取反对数才是zui后的浓度值。
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