产品推荐:原料药机械|制剂机械|药品包装机械|制冷机械|饮片机械|仪器仪表|制药用水/气设备|通用机械

技术中心

制药网>技术中心>本期话题>正文

欢迎联系我

有什么可以帮您? 在线咨询

纯化小技巧 | 组氨酸(His)标签蛋白不挂柱怎么办?

来源:百林科医药科技(上海)有限公司   2023年06月08日 09:04  
  如果您采用真核表达系统,需要将发酵液直接上柱纯化;亦或是样品中含有EDTA等还原剂,该如何应对?百林科全新一代亲和填料Ni Chromstar Excel助您快速通关!这款产品耐受100mM EDTA,适用于真核分泌表达的His标签蛋白纯化,众多优势如虎添翼。
 
    关于His标签  
 
  His标签由多个组氨酸残基构成(6个最为常见),由于组氨酸上的N原子能够与某些过渡金属离子形成配位键,利用这一特性,可以使用含有金属离子配基的填料来捕获和纯化His标签重组蛋白。其特点如下:
 
  ☑️ 分子量小,基本不影响蛋白质的结构和功能。
 
  ☑️ 组氨酸的咪唑环结构,可以结合二价金属离子,咪唑和组氨酸标签竞争性的结合在二价金属离子上,加入高浓度的咪唑即可将组氨酸标签蛋白洗脱下来。
 
  ☑️ 具有成本低、易表达等特点,是目前最为常用的蛋白标签。
 
    镍柱亲和层析原理  
 
  通常大家所接触的IDA、NTA和TED的不同螯合形式,就是基于镍离子的不同螯合策略实现。镍离子为六价,IDA偶联需要占用其三个位点,还剩余三个位点结合His标签;第二种偶联方式NTA则是占据镍离子的四个位点,剩余两个位点结合His标签;而第三种方式TED偶联则需要占据五个位点,剩余1个位点结合His标签。
 
  占据位点越多则镍离子被抓的越“牢固”,载量会相应的降低,若蛋白样品中有高浓度的螯合剂如EDTA等,则需要选择TED偶联的镍填料,减少镍离子的脱落。

IDA NTA TED
 
 
  百林科在标签蛋白纯化领域拥有种类广泛、质量优异的Ni系列产品。今天,我们将为大家重点介绍百林科层析填料新品——Ni Chromstar Excel
 
  这是一款亲和层析介质,将过渡金属离子 Ni2+ 预先螯合在以 TED为配基的 Chromstar 基架上制成。 该层析介质利用 Ni2+ 与蛋白质上某些氨基酸(主要是组氨酸)的侧链之间的相互作用,实现含有与不含有 这些氨基酸、含有这些氨基酸数量多与少的蛋白质的分离纯化,具有明显优势:
 
  ☑️ 耐受 100 mM EDTA
 
  ☑️ 应用于分泌真核培养液上清中的组氨酸蛋白的捕获或纯化
 
  ☑️ >10 mg 组氨酸标签蛋白 /ml 层析介质
 
  ☑️ 耐受碱洗,无需脱镍挂镍,有效避免交叉污染
 
  ☑️ 一步纯度可达90%以上
 
  ☑️ 较好的批间一致性
 
 

图1: Ni Chromstar Excel系列产品

 
 
 
    应用案例--   
    含100 mM EDTA的耐受测试  
 
测试条件
 
  •  样品信息:含100 mM EDTA的His蛋白上清液
 
  •  层析柱:0.77*10 cm,4.7ml
 
  •  Buffer A: 20mM PB, 0.5M Nacl, 20mM 咪唑
 
  •  Buffer B: 20mM PB, 0.5M NaCl, 500mM 咪唑
 
 

图2:Ni Chromstar Excel 层析图谱

图3:Ni Chromstar FF层析图谱

 
图4:Ni Chromstar Excel胶图

 
图5:Ni Chromstar FF胶图

图6:使用后,Ni Chromstar Excel(左侧)颜色无变化,Ni Chromstar FF(右侧)蓝色基本消失

表1:数据汇总

 
SUMMARY
 
  以上峰图和胶图可见,Ni Chromstar Excel较FF相比,能够耐受100 mM EDTA,一步捕获纯度达到90%,性能表现优异,洗脱后层析柱较使用前无颜色变化。

 

 
  欢迎扫码申请,大量层析产品均可试用哦!
 

免责声明

  • 凡本网注明"来源:制药网"的所有作品,版权均属于制药网,转载请必须注明制药网,https://www.zyzhan.com。违反者本网将追究相关法律责任。
  • 企业发布的公司新闻、技术文章、资料下载等内容,如涉及侵权、违规遭投诉的,一律由发布企业自行承担责任,本网有权删除内容并追溯责任。
  • 本网转载并注明自其它来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。
  • 如涉及作品内容、版权等问题,请在作品发表之日起一周内与本网联系,否则视为放弃相关权利。

企业未开通此功能
详询客服 : 0571-87858618