Elisa实验—试剂盒的测定方法及要求

　　Elisa实验—试剂盒的测定方法及要求

　　测定方法

　　试剂盒，通常采用固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA)进行测定。具体步骤如下：

　　‌标准品稀释与加样‌：在酶标包被板上设标准品孔，加入不同浓度的标准品。

　　‌加样‌：设空白孔和待测样品孔，加入样品稀释液和待测样品。

　　‌温育‌：用封板膜封板后置于适宜温度(如37℃)温育一定时间(如30分钟)。

　　‌洗涤‌：揭掉封板膜，弃去液体，加入洗涤液洗涤多次。

　　‌加酶‌：每孔加入酶标试剂(空白孔除外)。

　　‌再次温育和洗涤‌：重复温育和洗涤步骤。

　　‌显色‌：加入显色剂A和B，避光显色一定时间(如15分钟)。

　　‌终止‌：加入终止液终止反应。

　　‌测定‌：在酶标仪上，通常选择450nm波长测定各孔的吸光度(OD值)。根据标准品的浓度和对应的OD值绘制标准曲线，然后根据待测样品的OD值在标准曲线上查找对应的浓度‌。

　　要求

　　‌样本收集与处理‌：样本的收集和处理需严格按照说明书进行，如血清、血浆、组织匀浆等样本的收集方法和保存条件。样本应避免溶血、高血脂等情况，并在收集后尽快进行检测，如需保存，应置于-20℃或-80℃冰箱中，避免反复冻融‌。

　　‌洗涤液配置‌：洗涤液需用蒸馏水按一定比例稀释，如1:20稀释‌。

　　‌标准品配制‌：标准品需进行对倍稀释，以制备不同浓度的标准品溶液‌。

　　‌准确性、灵敏度和特异性‌：试剂盒应具有较高的准确性、灵敏度和特异性，以确保检测结果的可靠性。例如，人纤维母细胞表面抗原(FSP)ELISA试剂盒的准确性通常通过标准品线性回归与预期浓度相关系数R值来衡量，要求R值大于等于0.9900;灵敏度要求检测浓度小于0.1 ng/mL;特异性要求不与其它可溶性结构类似物交叉反应‌。

　　‌重复性‌：试剂盒的重复性也是衡量其质量的重要指标之一，通常要求板内、板间变异系数均小于15%‌。

　　‌贮藏与有效期‌：试剂盒应在规定的条件下贮藏(如2-8℃，避光防潮保存)，并在有效期内使用，以确保其性能稳定‌。

　　以上信息仅供参考，具体测定方法及要求可能因试剂盒品牌和型号的不同而有所差异，请在使用前仔细阅读说明书并遵循其指导进行操作。

　　天正信达小编提醒大家：检测前一定要仔细阅读以上内容，这样可以帮助您准确的测出结果。

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