ELISA实验操作要点：ELISA实验总是遇到这些问题，怎么处理?

　　 天正信达生物技术小编对ELISA实验操作中常见问题及处理方法如下：

　　1. 背景信号高

　　- 原因：抗体浓度过高、洗涤不充分、封闭不足或试剂污染。

　　- 处理：降低抗体浓度，增加洗涤次数，优化封闭剂浓度，确保试剂无污染。

　　2. 信号弱或无信号

　　- 原因：抗体或抗原失效、试剂浓度不足、孵育时间或温度不当。

　　- 处理：检查试剂有效期，优化抗体和抗原浓度，调整孵育时间和温度。

　　3. 孔间差异大

　　- 原因：加样不均、洗涤不一致、板孔未均匀包被。

　　- 处理：确保加样准确，洗涤时使用多通道移液器，包被时充分混匀抗原。

　　4. 标准曲线不佳

　　- 原因：标准品稀释不准确、试剂失效、操作误差。

　　- 处理：精确稀释标准品，检查试剂有效期，规范操作步骤。

　　5. 显色不均

　　- 原因：底物混合不均、孵育时间不一致、板孔污染。

　　- 处理：充分混匀底物，确保孵育时间一致，避免板孔污染。

　　6. 假阳性或假阴性

　　- 原因：交叉反应、样本处理不当、抗体特异性差。

　　- 处理：使用高特异性抗体，规范样本处理，优化实验条件。

　　7. 板底有气泡

　　- 原因：加样时产生气泡。

　　- 处理：加样后轻弹板底或用移液器吸除气泡。

　　8. 洗涤液残留

　　- 原因：洗涤不好。

　　- 处理：增加洗涤次数，确保每次洗涤后充分拍干。

　　9. 酶标仪读数异常

　　- 原因：酶标仪校准不当、板底不干净。

　　- 处理：定期校准酶标仪，保持板底清洁。

　　10. 试剂保存不当

　　- 原因：未按要求保存试剂。

　　- 处理：严格按照说明书保存试剂，避免反复冻融。

　　总结

　　ELISA实验需细致操作，注意试剂保存、加样准确、洗涤充分等关键步骤。遇到问题时，逐步排查原因并优化条件，确保结果可靠。天正信达提醒您可以通过以上方法，可以有效解决ELISA实验中的常见问题，提高实验的准确性和可靠性‌

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