ELISA中试剂:ELISA常用酶辣根过氧化酶(HRP)

　　ELISA中试剂:ELISA常用酶辣根过氧化酶(HRP)

　　ELISA(酶联免疫吸附试验)中，辣根过氧化酶(HRP)是常用的标记酶之一，因其的性质和广泛的应用优势而备受青睐。以下是关于HRP在ELISA中的主要特点和应用优势：

　　1. ‌HRP的基本特性‌

　　分子结构‌：HRP是一种糖蛋白，由无色的酶蛋白和深棕色的铁卟啉辅基组成，分子量约为40 kDa‌。

　　吸收特性‌：HRP在403 nm波长处有最大吸收峰，而去辅基的酶蛋白在275 nm波长处有最大吸收‌。

　　纯度与活性‌：HRP的纯度用RZ值表示，但RZ值仅反映血红素基团的含量，与酶活性无关。酶活性以单位(U)表示，即1分钟内将1 μmol底物转化为产物所需的酶量‌。

　　2. ‌HRP的应用优势‌

　　稳定性高‌：HRP对热和有机溶剂较为稳定，易于保存和使用‌。

　　价格低廉‌：与碱性磷酸酶(AP)相比，HRP价格更低，且易于获得高纯度制剂‌。

　　标记效率高‌：HRP在酶标记物制备中得率较高，适合大规模应用‌。

　　底物多样性‌：HRP可催化多种底物，如四甲基联苯胺(TMB)、邻苯二胺(OPD)等，显色反应灵敏且稳定‌。

　　3. ‌HRP在ELISA中的具体应用‌

　　检测流程‌：HRP通常作为二抗的标记酶，通过催化底物显色反应，将无色信号转化为显色产物，用于量化目标抗体水平‌。

　　底物选择‌：TMB是目前ELISA中常用的HRP底物，因其稳定性好、成色反应无需避光且无致突变作用‌。

　　反应终止‌：HRP的酶促反应可通过强酸或叠氮钠等终止剂有效终止‌。

　　4. ‌HRP的保存与使用‌

　　保存条件‌：HRP在干燥状态下于-20°C可长期保持稳定，冷冻保存时需使用甘油、磷酸钠等基质溶液以维持其活性‌。

　　使用注意事项‌：避免使用叠氮钠作为防腐剂，因其可能抑制HRP活性‌。

　　综上所述，HRP因其高稳定性、低成本、高效标记和广泛底物适用性，成为ELISA中常用的标记酶之一‌。

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