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人末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)ELISA试剂盒的实验使用说明书通常包含以下几个关键部分:产品概述、试剂盒组成、样本处理、实验步骤、结果计算、注意事项以及存储条件等。以下是一个基于多个来源综合整理的人末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)ELISA试剂盒的实验使用说明书概要:
一、产品概述
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)的含量。采用双抗体夹心法,通过形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,并利用TMB显色系统来定量检测TdT水平。
二、试剂盒组成
试剂盒通常包含以下组件:
酶标包被板
标准品及标准品稀释液
酶标试剂
样品稀释液
显色剂A液和B液
终止液
浓缩洗涤液
封板膜
密封袋
说明书
三、样本处理
血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
血浆:使用EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后离心。收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
组织标本:切割标本后称重,加入PBS(pH7.4)并匀浆。离心后收集上清,分装后一份待检测,其余冷冻备用。
四、实验步骤
标准品稀释:按照说明书要求,在酶标包被板上设标准品孔,并进行系列稀释。
加样:分别设空白孔、标准孔和待测样品孔。在酶标包被板上加入样品稀释液和待测样品。
温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
洗涤:揭掉封板膜,弃去液体,每孔加满洗涤液后静置并弃去,重复5次后拍干。
加酶:每孔加入酶标试剂(空白孔除外)。
再次温育和洗涤:重复温育和洗涤步骤。
显色:每孔加入显色剂A和B,轻轻震荡混匀后37℃避光显色10-15分钟。
终止:每孔加终止液终止反应。
测定:以空白孔调零,在450nm波长下测定各孔的吸光度(OD值)。
五、结果计算
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标绘制标准曲线。根据样品的OD值在标准曲线上查出相应的浓度,再乘以稀释倍数即为样品的实际浓度。
六、注意事项
试剂盒从冷藏环境中取出后应在室温平衡15-30分钟后方可使用。
浓洗涤液稀释时如有结晶析出,可在水浴中加温助溶。
各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性。
封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
底物应避光保存。
严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
七、存储条件
试剂盒通常应存放在2-8℃的冷藏环境中,避免阳光直射和潮湿。不同批号的试剂组分不得混用。
请注意,具体实验步骤和条件可能因试剂盒品牌和型号的不同而有所差异。因此,在实际操作中应严格遵循所使用试剂盒的说明书进行。
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